生物生物技術(shù)實(shí)踐 1、2 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 選修1

《生物生物技術(shù)實(shí)踐 1、2 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 選修1》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《生物生物技術(shù)實(shí)踐 1、2 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 選修1（65頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、選修 1專題1、2 生物技術(shù)實(shí)踐傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用考綱內(nèi)容能力要求命題分析實(shí)驗(yàn)：(1)運(yùn)用發(fā)酵加工食品的基本方法(2)測定食品加工中可能產(chǎn)生的有害物質(zhì)(3)微生物的分離和培養(yǎng)(4)某種微生物數(shù)量的測定(5)培養(yǎng)基對微生物的選擇作用(6)利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)與探究能力實(shí)驗(yàn)與探究能力實(shí)驗(yàn)與探究能力實(shí)驗(yàn)與探究能力實(shí)驗(yàn)與探究能力實(shí)驗(yàn)與探究能力1.新課標(biāo)卷以綜合題形式考查了傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)(泡菜的制作)、微生物的分離、計(jì)數(shù)和篩選等。在本部分內(nèi)容中，微生物的培養(yǎng)、分離及計(jì)數(shù)考查較多，屬于高頻考點(diǎn)，2017 考查了微生物的培養(yǎng)、分離及發(fā)酵的相關(guān)內(nèi)容。2

2、.命題趨勢：以生活實(shí)踐為背景，以綜合題形式考查發(fā)酵及微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識?？季V導(dǎo)讀項(xiàng)目果酒果醋腐乳泡菜微生物酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌制作原理在無氧的條件下，酵母菌將葡萄糖分解為酒精等物質(zhì)在有氧的條件下，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；缺少糖源時(shí)，醋酸菌可將乙醇(酒精)變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿崦沟任⑸锂a(chǎn)生的蛋白酶和脂肪酶將豆腐中的蛋白質(zhì)和脂肪分解為小分子的物質(zhì)在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸氣體條件_有氧_無氧溫度1825 _1518 _一、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用無氧3035 有氧1.果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作原理常溫2.酒精的檢測重鉻酸鉀灰綠(1)方法：可用_檢測酒精。(2)原理：在酸

3、性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)_色。對氨基苯磺酸玫瑰紅標(biāo)準(zhǔn)顯色液3.亞硝酸鹽含量測定的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與_發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與 N1萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合，形成_色染料。將顯色后的樣品與_進(jìn)行目測比較，可大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。二、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.培養(yǎng)基(1)培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同要求，配制出供其_的營養(yǎng)物質(zhì)。生長繁殖(2)根據(jù)物理狀態(tài)的不同分為半液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和_培養(yǎng)基。固體選擇(3)根據(jù)培養(yǎng)基的功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、_培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。碳源氮源pH(4)每種培養(yǎng)基一般都含有水、_、_、無機(jī)鹽。另外要滿足微生物對_、特殊營養(yǎng)物質(zhì)及氧氣的

4、要求。2.無菌技術(shù)707515(1)巴 氏 消 毒 法 在 _ 煮 30 min 或 者 在 80 煮_min ，可以殺死牛奶中的微生物，并且使牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞。灼燒干熱芽孢和孢子(2)接種環(huán)常用_滅菌；需要干燥且耐高溫的物品可采用_滅菌，另外還可以用高壓蒸汽滅菌。(3)滅菌和消毒最主要的區(qū)別是是否殺死_。3.微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)接種環(huán)涂布器(1)配制培養(yǎng)基：計(jì)算稱量溶化調(diào) pH分裝包扎。(2)滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋加水將培養(yǎng)基放入鍋內(nèi)密封排冷氣維持壓力取出倒平板(或擱置斜面)。(3)接種平板劃線法稀釋涂布平板法接種過程：洗凈雙手點(diǎn)燃酒精燈接種貼標(biāo)簽。接種工具：包括_、_。接種方法：_、_

5、。(4)培養(yǎng)：接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。4.土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)種菌篩選尿素稀釋涂布平板法培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法特點(diǎn)：_是唯一氮源。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法：_、_。(3)設(shè)置對照的主要目的：排除實(shí)驗(yàn)組中_對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。非測試因素5.分解纖維素的微生物的分離纖維素分解菌的篩選(1)實(shí)驗(yàn)原理透明圈纖維素酶的催化原理篩選纖維素分解菌的原理即可根據(jù)是否產(chǎn)生_來篩選纖維素分解菌。(2)過程土壤取樣：選擇富含纖維素的環(huán)境中的土壤。選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量。梯度稀釋 微生物倒平板挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 葡萄糖判斷正誤1.在家庭中用鮮葡萄制作

6、果酒時(shí)，應(yīng)向發(fā)酵罐中持續(xù)通入空氣。()2.腐乳的制作利用了毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶和脂肪酶。()3.用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，一般就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。()答案：1.2.3.菌種酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物分類真核生物原核生物真核生物原核生物代謝類型異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧繁殖方式適宜條件下出芽生殖二分裂孢子生殖二分裂生產(chǎn)應(yīng)用釀酒、發(fā)面釀醋制作腐乳制作泡菜、酸奶發(fā)酵條件前期需氧、后期不需氧一直需氧一直需氧一直無氧考點(diǎn)一微生物與發(fā)酵原理考點(diǎn)梳理1.與傳統(tǒng)發(fā)酵有關(guān)的幾種微生物的比較2.果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作過程及注意事項(xiàng)(1)果酒、果醋制作過程：挑選

7、葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒；挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵果醋。注意事項(xiàng)a.材料的選擇與處理：選擇新鮮的葡萄，榨汁前，先將葡萄洗干凈再去除枝梗。b.防止發(fā)酵液被污染：榨汁機(jī)要清洗干凈并晾干；發(fā)酵瓶要清洗干凈，并用體積分?jǐn)?shù)為 70%的酒精消毒，或用洗滌劑洗滌；裝入葡萄汁后，封閉充氣口。c.控制好發(fā)酵的條件：葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有 1/3 的空間，其目的是先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸快速繁殖，增加菌種，耗盡氧氣再進(jìn)行酒精發(fā)酵；控制好溫度：果酒制作時(shí)，溫度控制在 1825，果醋制作時(shí)，溫度嚴(yán)格控制在 3035；注意是否需要通氣：果醋發(fā)酵時(shí)，需要適時(shí)通過充氣口充氣。(2)腐乳制作過程：讓豆腐上長出毛霉加

8、鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制。注意事項(xiàng)a.控制好材料中鹽、酒的用量：鹽和酒精過少，不足以抑制微生物的生長；酒精含量過多，則會延長腐乳成熟的時(shí)間。b.防止雜菌污染：用來腌制腐乳的玻璃瓶要洗涮干凈并用沸水消毒；裝瓶時(shí)，操作要迅速小心，封瓶時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。c.注意發(fā)酵時(shí)的溫度。(3)泡菜制作過程：選擇原料修整、洗滌、晾曬、切分成條狀或片狀配制泡菜鹽水把處理后的原料、鹽水等其他調(diào)味料裝入瓶中發(fā)酵成品。注意事項(xiàng)a.泡菜壇的選擇：選用無裂紋、無砂眼、壇沿深、蓋子吻合好的泡菜壇。b.材料的選擇及用量：蔬菜應(yīng)新鮮，若放置的時(shí)間過長，蔬菜中的硝酸鹽易被還原成亞硝酸鹽；清水與鹽的質(zhì)量比

9、是4 1，鹽水要煮沸后冷卻待用，煮沸鹽水可達(dá)到殺菌和去除氧氣的作用。c.氧氣的控制：壇蓋邊沿的水槽中要注滿水，發(fā)酵過程中，要及時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分，以保證乳酸菌發(fā)酵的無氧環(huán)境。高考探究考向微生物與發(fā)酵原理典例 1(2017 年江蘇卷)下列關(guān)于“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()A.控制發(fā)酵溫度的主要目的是腐乳調(diào)味B.腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用C.毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉D.成品腐乳表面的黏性物質(zhì)主要由細(xì)菌產(chǎn)生解析溫度通過影響酶的活性影響腐乳發(fā)酵，控制發(fā)酵的溫度主要有利于毛霉等微生物的生長和腐乳發(fā)酵，A 錯(cuò)誤；香辛料和料酒都能抑制微生物的生長，具有防腐作用，B 正確；毛霉的主要

10、作用是產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，將蛋白質(zhì)和脂肪分解成小分子化合物，C 錯(cuò)誤；成品腐乳表面的黏性物質(zhì)主要是毛霉產(chǎn)生的，毛霉屬于真菌，D 錯(cuò)誤。答案B考向預(yù)測1.(2017 年新課標(biāo)卷)豆豉是大豆經(jīng)過發(fā)酵制成的一種食品。為了研究影響豆豉發(fā)酵效果的因素，某小組將等量的甲、乙兩菌種分別接入等量的 A、B 兩桶煮熟大豆中并混勻，再將兩者置于適宜條件下進(jìn)行發(fā)酵，并在 32 h 內(nèi)定期取樣觀測發(fā)酵效果?；卮鹣铝袉栴}：(1)該實(shí)驗(yàn)的自變量是_、_。(2)如果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵容器內(nèi)上層大豆的發(fā)酵效果比底層的好，說明該發(fā)酵菌是_。(3)如果在實(shí)驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn) 32 h 內(nèi)的發(fā)酵效果越來越好，且隨發(fā)酵時(shí)間呈直線上升關(guān)系，則無法確定發(fā)

11、酵的最佳時(shí)間；若要確定最佳發(fā)酵時(shí)間，還需要做的事情是_。(4)從大豆到豆豉，大豆中的成分會發(fā)生一定的變化，其中，蛋 白 質(zhì) 轉(zhuǎn) 變 為 _，脂 肪 轉(zhuǎn) 變 為_。解析：(1)該實(shí)驗(yàn)的自變量是菌種、發(fā)酵時(shí)間。(2)如果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵容器內(nèi)上層大豆的發(fā)酵效果比底層的好，說明該發(fā)酵菌是好氧菌。(3)如果在實(shí)驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn) 32 h 內(nèi)的發(fā)酵效果越來越好，且隨發(fā)酵時(shí)間呈直線上升關(guān)系，則無法確定發(fā)酵的最佳時(shí)間；若要確定最佳發(fā)酵時(shí)間，還需要做的事情是延長發(fā)酵時(shí)間，觀測發(fā)酵效果，最好的發(fā)酵效果所對應(yīng)的時(shí)間即為最佳發(fā)酵時(shí)間。(4)從大豆到豆豉，大豆中的成分會發(fā)生一定的變化，其中，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)榘被岷投嚯?，脂肪轉(zhuǎn)變?yōu)橹?/p>

12、酸和甘油。答案：(1)菌種發(fā)酵時(shí)間(2)好氧菌(3)延長發(fā)酵時(shí)間，觀測發(fā)酵效果，最好的發(fā)酵效果所對應(yīng)的時(shí)間即為最佳發(fā)酵時(shí)間(4)氨基酸和多肽脂肪酸和甘油2.乙醇等“綠色能源”的開發(fā)備受世界關(guān)注，利用玉米秸稈生產(chǎn)燃料酒精的大致流程為：(1)玉米秸稈預(yù)處理后，應(yīng)該選用_酶和_酶形成纖維二糖，再使用_酶使之轉(zhuǎn)化為發(fā)酵所需的葡萄糖。(2)從以下哪些微生物中可以提取上述酶？_(多選)。A.釀制果醋的醋酸菌B.生長在腐木上的霉菌C.制作酸奶的乳酸菌D.反芻動物瘤胃中生存的某些微生物(3)若從土壤中分離產(chǎn)生這種酶的微生物，所需要的培養(yǎng)基為_(按功能分)，培養(yǎng)基中的碳源為_，微生物在純化培養(yǎng)時(shí)常用方法是_和_

13、。(4)發(fā)酵階段需要的菌種是_，生產(chǎn)酒精時(shí)要控制的必要條件是_。答案：(1)C1CX葡萄糖苷(2)BD(3)選擇培養(yǎng)基纖維素平板劃線法稀釋涂布平板法(4)酵母菌無氧(密封或密閉)3.下圖是泡菜的制作及測定亞硝酸鹽含量的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，請據(jù)圖分析，回答下列問題：(1)制作泡菜宜選用新鮮的蔬菜或其他原料，原因是_。(2)制備泡菜的鹽水中，清水與鹽的質(zhì)量比為_，鹽水煮沸的目的是為了殺滅雜菌，冷卻后再使用的目的是為了保證_等微生物的生命活動不受影響。(3)泡菜的制作方法不當(dāng)，很容易造成泡菜變質(zhì)，甚至發(fā)霉變味，發(fā)霉主要與_有關(guān)。(4)測定亞硝酸鹽含量的方法是_。(2)4 1乳酸菌答案：(1)亞硝酸鹽含量

14、低(3)霉菌(4)比色法考點(diǎn)二微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)考點(diǎn)梳理1.微生物的營養(yǎng)物質(zhì)及功能：微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、無機(jī)鹽和水這四大類。此外還要滿足不同微生物生長對 pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源能 提 供 所 需碳 元 素 的 物質(zhì)構(gòu)成生物體的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機(jī)化合物(CO2、NaHCO3)，有機(jī)化合物(糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等)氮源能 提 供 所 需氮 元 素 的 物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機(jī)化合物(N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽)，有機(jī)化合物 (尿素、牛肉膏、蛋白胨等)(1)微生物最常利用的碳源是糖類，尤

15、其是葡萄糖；最常利用的氮源是銨鹽、硝酸鹽。(2)對異養(yǎng)微生物來說，含 C、H、O、N 的化合物既是碳源又是氮源、能源。(3)有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)，生物自己能合成，如大腸桿菌能合成某些維生素作為特殊營養(yǎng)物質(zhì)。劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)和用途化學(xué)成分天然培養(yǎng)基利用動、植物或微生物體(包括用其提取物)制成的培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)豐富、種類多樣、配制方便、價(jià)格低廉，缺點(diǎn)是化學(xué)成分不清楚、不穩(wěn)定。主要用于微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)或發(fā)酵工業(yè)合成培養(yǎng)基按微生物的營養(yǎng)要求精確設(shè)計(jì)，用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)是成分及量確切可知，缺點(diǎn)是價(jià)格較貴、配制復(fù)雜，且微生物生長比較一般。主要用于微生物的分類和鑒定2

16、.培養(yǎng)基的種類劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)和用途化學(xué)成分半合成培養(yǎng)基主要以化學(xué)試劑配制，同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。特點(diǎn)是配制方便，成本低，微生物生長良好。主要用于工業(yè)生產(chǎn)物理狀態(tài)液體培養(yǎng)基呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基，用于微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)固體培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基，用于菌種分離、鑒定、菌落計(jì)數(shù)、檢測雜菌、育種、菌種保藏等半固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入少量凝固劑(如 0.2%0.5%的瓊脂)而制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基?？捎糜谟^察細(xì)菌的運(yùn)動能力，進(jìn)行厭氧菌的培養(yǎng)及菌種保藏等(續(xù)表)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)和用途功能選擇性培養(yǎng)基根據(jù)某微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某些物理、化學(xué)因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，具

17、有使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌的功能?？捎糜诰N篩選鑒別培養(yǎng)基一類加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達(dá)到只需用肉眼辨別顏色就能方便地從近似菌落中找到目的菌菌落的培養(yǎng)基。可用于菌種鑒別、計(jì)數(shù)(續(xù)表)(1)加入培養(yǎng)基中的凝固劑(如瓊脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。(2)選擇培養(yǎng)基一般只生長具有特定目的的微生物，鑒別培養(yǎng)基中可以存在其他微生物，而且能鑒別特定的微生物。項(xiàng)目概念常用方法應(yīng)用的范圍消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢或孢子)煮沸消毒法：在100 煮沸56 min一般物品巴氏消毒法：7075 煮30 mi

18、n或在80 煮15 min一些不耐高溫的液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源等紫外線消毒法：30 W紫外燈照射30 min接種室3.消毒與滅菌項(xiàng)目概念常用方法應(yīng)用的范圍滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼燒滅菌，用酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒接種工具的滅菌干熱滅菌：160170 下滅菌12 h玻璃器皿、金屬工具的滅菌高壓蒸汽滅菌：121 條件下，滅菌1530 min培養(yǎng)基及容器的滅菌(續(xù)表)注：消毒與滅菌最大的區(qū)別是芽孢和孢子是否存活。接種方法操作過程注意事項(xiàng)平板劃線法接種環(huán)滅菌取菌液在培養(yǎng)液上劃線培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)(1)接種環(huán)的灼燒：第一次灼燒：

19、避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線之前的灼燒：殺死上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上的菌種，使每次劃線的菌種均來自上次劃線末端；劃線結(jié)束的灼燒：殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作人員(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高而殺死菌種(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破4.常用的微生物接種方法(1)接種方法的比較接種方法操作過程注意事項(xiàng)稀釋涂布平板法稀釋菌液取菌液于培養(yǎng)基表面涂布器滅菌均勻涂布菌液培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)稀釋操作：每支試管及其中 9 mL 水、移液管均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰 1

20、2 cm 處涂布器的滅菌：涂布器用體積分?jǐn)?shù)為 70%的酒精消毒，取出時(shí)多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃后冷卻；不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精(續(xù)表)(2)倒平板的注意事項(xiàng)培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至 50 左右，才能用來倒平板。整個(gè)操作過程需在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。平板冷凝后要倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。高考探究考向微生物的培養(yǎng)典例 2(2014 年四川卷)有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過程如下圖甲、乙所示：甲乙(

21、1)微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、_四類，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。(2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和_，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配置成_保存?zhèn)溆谩?3)純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有_。(4)為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是_，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？_。解析(1)微生物生長所需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源

22、、水和無機(jī)鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因?yàn)槠湓试S特定的微生物生長，同時(shí)又能抑制或阻止其他微生物的生長。(2)植物組織培養(yǎng)常需要添加的植物激素有生長素和細(xì)胞分裂素。MS 培養(yǎng)基的成分一般先分別配制成母液備用。(3)平板劃線法接種時(shí)通常用接種環(huán)劃線。第二區(qū)域只有第一條線無菌落，而其他的劃線都有菌落，很可能是因?yàn)榻臃N環(huán)在灼燒后未冷卻，第一次劃線時(shí)將菌種燙死，而后接種環(huán)冷卻，能正常劃線，也可能是第一次劃線時(shí)劃線未從第一區(qū)域末端開始，使接種環(huán)上無菌種。(4)題中實(shí)驗(yàn)為取得菌種培養(yǎng)液過濾離心后取上清液，加入蛋白酶處理后，測得其對苯磺隆的降解率。由此可判定實(shí)驗(yàn)假設(shè)是目的菌株通過分泌某種蛋白質(zhì)來降解苯磺隆。但由于缺乏

23、空白對照，不能比較蛋白酶的處理是否降低苯磺隆降解率，該實(shí)驗(yàn)不能得出相應(yīng)結(jié)論。答案(1)氮源和無機(jī)鹽確保只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長和繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域(3)接種環(huán)末端開始不合理，缺少空(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)白對照(1)每次劃線前和劃線后，接種環(huán)都要進(jìn)行灼燒滅菌，因此需要灼燒接種環(huán) 6 次。其中第一次灼燒是為了防止雜菌污染；每次劃線前灼燒是為了殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端；最后一次灼燒是為了防止接種的微生物擴(kuò)散，造成新的污染。(2)下一次劃線的菌種來源是上一次劃線的最末端，所以前幾次劃線都是上一次的尾和下一次的首相

24、連的，但是第五次劃線不與第一次劃線相連。(3)在第五次劃線上的菌落往往是由一個(gè)細(xì)菌繁殖形成的。(4)實(shí)際上菌落數(shù)都要小于細(xì)菌數(shù)，因?yàn)橛械木涫莾蓚€(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成的。成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4指示劑瓊脂含量/g10.05.05.02.00.212.0將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到 1000 mL考向預(yù)測4.(2017 年江西贛中南五校聯(lián)考)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，請根據(jù)表格和所學(xué)知識回答下列相關(guān)問題：(1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于_。(2)若根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于_(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。若要用上述培養(yǎng)基來篩選出土壤中的尿素分解菌，培養(yǎng)基的

25、營養(yǎng)成分必需怎樣更改？_，并用_作為指示劑。(3)在微生物培養(yǎng)的過程中，為防止雜菌污染，需要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_。(4)圖 1 和圖 2 是培養(yǎng)某細(xì)菌的結(jié)果圖，其對應(yīng)的接種方法分別是_和_，這兩種方法接種后培養(yǎng)基上都可以得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖所形成的_。圖 1 所用的接種方法可用來對活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。此外，測定微生物數(shù)目的另一種方法是_。圖 1圖 2(5)以下過程中所利用的主要微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與大腸桿菌較相似的有_。A.制作果酒C.制作泡菜B.由果酒制作果醋D.制作腐乳解析：(1)大腸桿菌只能從環(huán)境中攝取有機(jī)物，不能自己合成有機(jī)物，屬于分解者。(2)該培養(yǎng)基中含有指示劑

26、，屬于鑒別培養(yǎng)基。尿素分解菌可以分解尿素，而其他微生物不能，因此可將培養(yǎng)基中的蛋白胨改為尿素用于篩選土壤中的尿素分解菌，并用酚紅作為指示劑，尿素分解菌分解尿素產(chǎn)生的 NH3 可使酚紅變紅。(3)培養(yǎng)微生物時(shí)，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿需要滅菌，操作者雙手需要進(jìn)行消毒。(4)圖 1 采用的是稀釋涂布平板法，圖2 采用的是平板劃線法。單個(gè)微生物細(xì)胞繁殖所形成的細(xì)胞群叫菌落。(5)A、B、C、D 中所用到的主要微生物分別是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大腸桿菌和乳酸菌都是原核細(xì)胞，結(jié)構(gòu)相似。答案：(1)分解者(2)鑒別 將蛋白胨改成尿素酚紅(3)滅菌消毒(4)稀釋涂布平板法平板劃線法菌落顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

27、(或“血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法”)(5)BC5.無菌操作是微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵。傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)和微生物分離、純化、應(yīng)用過程及植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，均要無菌操作?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問題：(1)消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念，滅菌是指徹底殺滅微生物使其永遠(yuǎn)喪失生長繁殖的能力。消毒指僅殺死一部分對人體有害的病原菌而對被消毒的物體基本無害。下列哪些事物適用于消毒處理？_。皮膚飲用水牛奶注射器培養(yǎng)皿接種環(huán)培養(yǎng)基果汁醬油手術(shù)刀A.C.B.D.以上全部(2)配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行_，接種前要進(jìn)行_，在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定注意要在無菌條件下進(jìn)行。(3)在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，獲得純凈培養(yǎng)

28、物的關(guān)鍵是_。上圖是利用_法進(jìn)行大腸桿菌接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。為達(dá)到這一目的，操作上應(yīng)注意：每次劃線前要_。冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃。首尾區(qū)_。(4)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(5)利用培養(yǎng)基不僅可以分離培養(yǎng)大腸桿菌，也可以進(jìn)行植物組織培養(yǎng)。與大腸桿菌培養(yǎng)明顯不同的是，用于組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中還需要加入_。(6)有位同學(xué)在家制作泡菜時(shí)，為避免雜菌污染而向泡菜壇中加入了青霉素，結(jié)果發(fā)酵失敗，原因可能是_。解析：(1)應(yīng)采用消毒，應(yīng)采用滅菌，故選 A。(2)配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分

29、裝前必須調(diào)整pH，培養(yǎng)基接種前要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，再進(jìn)行倒平板。(3)微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的關(guān)鍵在于防止雜菌污染，采用平板劃線法接種，需要注意的是連續(xù)劃線時(shí)，每次劃線前要灼燒接種環(huán)，同時(shí)劃線結(jié)束首尾區(qū)不能相連。(4)檢測培養(yǎng)基是否被污染，對固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種(或接種等量無菌水)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當(dāng)時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。(5)植物組織培養(yǎng)的 MS 培養(yǎng)基中需要加入植物激素(生長素和細(xì)胞分裂素)。(6)制作泡菜時(shí)，為避免雜菌污染而向泡菜壇中加入了青霉素，結(jié)果發(fā)酵失敗，原因可能是青霉素殺死了乳酸菌。答案：(1)A (2)調(diào)整 pH 高壓蒸汽滅菌(3)防止外來雜菌的

30、入侵平板劃線灼燒接種環(huán)不連接(不重疊)(4)將未接種(或接種等量無菌水)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當(dāng)時(shí)間(5)植物激素(或生長素和細(xì)胞分裂素)(6)青霉素殺死了乳酸菌項(xiàng)目分離分解尿素的細(xì)菌分離分解纖維素的微生物原理提供有利于目的菌株生長的條件(如營養(yǎng)、溫度、pH 等)，同時(shí)抑制其他微生物的生長，常用選擇培養(yǎng)基篩選剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌考點(diǎn)三微生物的分離與計(jì)數(shù)考點(diǎn)梳理1.分離土壤中分解尿素的細(xì)菌與分離分解纖維素的微生物的比較項(xiàng)目分離分解尿素的細(xì)菌分離分解纖維素的微

31、生物過程土壤取樣樣品稀釋培養(yǎng)與觀察土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布于含剛果紅(CR)的鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落發(fā)酵培養(yǎng)鑒定酚紅指示劑(變紅)剛果紅(產(chǎn)生透明圈)選擇培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基，尿素為唯一氮源液體培養(yǎng)基，纖維素為唯一碳源鑒別培養(yǎng)基液體固體(續(xù)表)2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)稀釋涂布平板法原理：當(dāng)樣品的稀釋濃度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。操作a.設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。b.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在 30300 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株

32、數(shù)(C/V)M，其中 C 代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V 代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M 代表稀釋倍數(shù)。(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。高考探究考向微生物的分離與純化典例 3(2016 年新課標(biāo)卷)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉栴}：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用_對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，進(jìn)行梯度稀釋的理由是_。(2)推測在分離純化所用的

33、培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有_和_。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出_的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在20長期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。解析(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無菌水對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋；進(jìn)行梯度稀釋的理由是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。(2)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和利于乳酸菌的識別和分離；分離純化時(shí)應(yīng)挑選出在平板上有透明圈的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在20長期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的甘油。泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難

34、答案(1)無菌水分離到單個(gè)菌落(2)中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸利于乳酸菌的識別和分離具有透明圈(3)甘油考向預(yù)測6.(2014 年新課標(biāo)卷)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問題：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3 種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成_。(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR 可與纖維素形成_色復(fù)合物。用含有 CR 的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的_。培養(yǎng)基 酵母膏 無機(jī)鹽淀粉纖維素粉 瓊脂 CR 溶液水甲乙(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲

35、、乙兩種培養(yǎng)基(成分見下表)：注：“”表示有，“”表示無。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_；培養(yǎng)基乙_(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。解析：(1)纖維素是一種以葡萄糖為單體形成的高分子化合物。纖維素能被土壤中某些微生物分泌的纖維素酶分解，如下圖：(2)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(3)纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，纖維素分解菌鑒別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，要分離和鑒別纖維素分解菌，需要以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙不具有選擇的作用。答案：(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素粉