泛發(fā)性膿皰型銀屑病與HLADQB1等位基因的相關(guān)性研究

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1、中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- http:/www.dr- 定義與分型v在最近新版的Rook教科書中，泛發(fā)性膿皰型銀屑病(GPP)被定義為銀屑病的一種不尋常變型，并以急性、亞急性、偶而慢性的損害上發(fā)生無菌性膿皰為中心特征。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 依據(jù)臨床表現(xiàn)把GPP分為5個亞型。即：v(1)急性泛發(fā)型(Von Zumbusch型)v(2)妊娠期GPP(IP)v(3)兒童型GPPv(4)環(huán)型GPPv (5)局限型GPP(不包括手足)中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 檢查、處理等不同。支持觀點：病理表現(xiàn)相似、妊娠可誘發(fā) GPP、都具有HLA-B

2、27 抗原。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- GPP的關(guān)系可概括為:v臨床表現(xiàn)的包容性，即：二者皮損可共存、轉(zhuǎn)化。v免疫異常的相似形，即：二者皮損處都有CD4+、CD8+T細胞的浸潤,IL-6、IL-8高水平表達,白細胞聚集形成微膿腫。v遺傳背景的明顯差異性(后述)。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- GPP 亞型:v有PsV病史的GPP與無PsV病史的GPP。vPsV陽性GPP發(fā)病年齡偏晚，誘發(fā)因素常是先前的糖皮質(zhì)激素治療或不規(guī)則撤退。v PsV陰性GPP發(fā)病年齡偏早，誘發(fā)因素多為上呼吸道感染。v遺傳異質(zhì)性后述。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- HLA

3、復(fù)合體與疾病關(guān)聯(lián)程度超過人類基因組任何一個區(qū)域。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- locus)上的特定等位基因(如HLA等位基因)與疾病性狀的相關(guān)程度。一般通過患病人群和健康人群作HLA分型后，用統(tǒng)計學(xué)方法(通常用2-tesf)進行判別，故屬于病例對照研究，又稱群體相關(guān)研究（population association studies）。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- risk,RR)來估計。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- 關(guān)聯(lián)分析雖只能

4、將致病基因粗略地定位于某個位置，卻能為以后的基因精確定位、克隆等研究提供重要依據(jù)和線索。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 血清學(xué)方法：只能檢測HLA基因產(chǎn)物即HLA抗原寬特異性，不能檢測HLA基因本身的多態(tài)性。v 細胞學(xué)方法：由于分型細胞來源困難，且只能檢少數(shù)HLA-DW、HLA-DPW抗原，現(xiàn)已基本不用。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- Dausset等(1977)首次報道了GPP與HLA-A13、B17、B27相關(guān)后，v Karvonen和 Zacha

5、riae等 隨后證實HLA-B27與GPP強相關(guān)，與PsV不相關(guān)；從而首次揭示了PsV與GPP的遺傳背景具有差異性。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- Ocklawaha等（1996）對日本541例GPP的流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)：v GPP與HLA-A2、B14、B35有弱相關(guān)；v PsV陽性的GPP與 HLA-A1、B37、DRw10顯著相關(guān)；PsV陰性的GPP不與它們相關(guān)，v 從而首次揭示PsV陽性的GPP與PsV陰性的GPP 具有遺傳異質(zhì)性。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- HLA-DQB1*0303與PsV陰性的GPP顯著相關(guān)。v進一步驗證了PsV陽性的 GPP與P

6、sV陰性的GPP 的遺傳異質(zhì)性。v我國只有宋芳吉報道北方漢族GPP患者與HLA-B13顯著相關(guān)，v國內(nèi)尚未有HLA-II基因與GPP相關(guān)的研究文獻。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 的 本文采用PCR-SSP技術(shù)，對山東籍漢人GPP患者和健康對照進行HLA-DQB1等位基因分型研究，目的在于：中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 異性，從而為臨床分型提供依據(jù)。4)長遠目的為研究中國漢人與GPP相關(guān)性提供一 些遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- DNA擴增儀 穩(wěn)壓電泳儀 紫外線分析儀 臺式高速離心機 旋渦混合器 移液器(2l，20l，200l各一個

7、)序列特異性引物（SSP）PCR反應(yīng) Buffer TaqDNA聚合酶中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 診的GPP患者和近2年來門診新發(fā)現(xiàn)并 確診的GPP患者，所有患者均為山東 籍漢族人，性別、年齡不限。v對照資料：94例全部來自山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東籍漢族大學(xué)生及教職工自愿健康獻血員，彼此間無血緣關(guān)系，個體及家族中無 銀屑病及其病史。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 0.5ml塑料試管里，稍混勻加蓋后，-80超低溫冰箱保存。qDNA抽提：應(yīng)用上海生工提供的抽提試劑盒。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- PCR反應(yīng)體系：每個PCR反應(yīng)體系為25l。其中含有

8、10PCR Buffer 2.5ml；0.4 mol特異性引物；0.2 mol內(nèi)對照引物；200 mol的dNTP；1.5 mmol MgCl2；1 u Tag DNA酶；2l 模板DNA。qPCR反應(yīng)參數(shù)：第一步94預(yù)變性5 min。第二步94 變性30 s55-60退火50 s72延伸30s32個循環(huán)。第3步72延伸5min。第4步4保存2 h。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- bp)，在其前方對應(yīng)欲檢測等位基因大小的位置出現(xiàn)明亮的帶時判為陽性；如果未出現(xiàn)陽性對照帶，視為PCR反應(yīng)不成功,需重新擴增。電泳圖象，見圖-1，-2，-3，-4，中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www

9、.dr- DQB1*0603、0201、0602200bp100bp中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 無PsV史及家族史200bp100bp中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 有關(guān)節(jié)型銀屑病史200bp100bp中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- DQB1*0603、0201 兒童GPP PsV、家族史陽性200bp100bp中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 10.0軟件包，把相關(guān)數(shù)據(jù)輸入計算機計算出相關(guān)參數(shù)2、P和RR值。v校正Pc(P correction)由Bonferrn法計算，即PC=P所檢測的等位基因數(shù)。v以PC0.05作為顯著性

10、檢驗水準。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- frenquency,AF)依據(jù)Hardy-Weinberg平衡定律，由公式AF=1-(1-antigen frequency)1/2計算，其中antigen frequency為檢測陽性數(shù)占檢測總數(shù)的百分數(shù)。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- http:/www.dr- Zumbusch型27 例；LGPP 6例；妊娠期GPP 3例；AC/GPP 2例；8例 兒童均為 Von Zumbush型。v9例做病理檢查，表現(xiàn)為角化不全，表皮內(nèi)中性粒細胞移入，角層下棘層上部Kogoj微膿腫，棘層不同程度的肥厚；真皮淺層血管擴張，周圍

11、淋巴細胞、中性粒細胞浸潤。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- 實驗結(jié)果，見：表1 表2 表3 表4中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- GPP患者與對照組患者與對照組 HLA-DQB1等位基因頻率分布比較等位基因頻率分布比較 等位基因 患 者 組 對 照 組n=38 n=94 2 P PC RR 頻數(shù) 頻率 頻數(shù) 頻率 DQB1*0602 11 0.157 10 0.055DQB1*0603 11 0.157 7 0.038DQB1*0604 1 0.013 23 0.131DQB1*0201 15 0.222 7 0.038 6.78 0.009 0.117 3.42

12、10.6 0.001 0.013 5.06 8.674 0.003 0.039 0.08 19.98 0.0004 0.005 8.10 中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- L A-DQB1等 位 基因P s V 陽 性GPP(n=18)對照組(n=94)2 P PC RR頻數(shù) 頻率頻數(shù) 頻率DQB1*0602 3 0.087 10 0.055 0.11 0.436 5.668 1.68DQB1*0603 9 0.292 7 0.038 19.00 0.0004 0.005 12.42DQB1*0201 13 0.472 7 0.038 38.91 0.0004 0.005 32.

13、31表表2 PsV陽性陽性GPP與對照組與對照組 基因頻率分布比較基因頻率分布比較中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- PsV陰性陰性GPP與對照組與對照組 基因頻率分布比較基因頻率分布比較H L A-DQB1等位基因PsV陰性GPP(n=20)對照組(n=94)2 P PC RR頻數(shù) 頻率頻數(shù) 頻率DQB1*0602 8 0.225 10 0.055 8.60 0.003 0.039 5.60DQB1*0603 2 0.051 7 0.038 0.00 0.657 8.541 1.38DQB1*0201 2 0.051 7 0.038 0.00 0.657 8.541 1.38中華

14、醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- L A-DQB1等位基因P s V 陽 性GPP(n=20)P s V 陰 性GPP(n=20)2 P PC RR頻數(shù) 頻率頻數(shù) 頻率DQB1*0602 3 0.087 8 0.225 1.50 0.160 2.08 0.30DQB1*0603 9 0.292 2 0.051 7.37 0.007 0.091 9.00DQB1*0201 13 0.472 2 0.051 15.35 0.0004 0.005 23.40表表4 PsV 陽性陽性GPP與與PsV 陰性陰性GPP基因頻率比較基因頻率比較中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- htt

15、p:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- 2個共同的可能的易感肽鏈結(jié)合區(qū)。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- 推測：DQB1*0201、0603、0602這3個等位基因編碼的DQ2和DQ6分子鏈中可能存在著與GPP易感的肽鏈結(jié)合區(qū)。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- PsV陽性GPP與對照組比較 DQB1*0201、0603的頻率在PsV陽性GPP組中顯著高于對照組(RR=32.31，PC=0.005；RR=12.42，PC=0.005)。q PsV陰

16、性GPP與對照組比較 DQB1*0602頻率顯著高于對照組(RR=5.6，PC=0.039)。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- DQB1*0201、0603的頻率在PsV陽性GPP組高于PsV陰性組（RR=23.4，PC=0.005；RR=9.0，P=0.007）。通過 以上三個比較表明：DQB1*0201、0603與PsV陽性GPP關(guān)聯(lián)；DQB1*0602與PsV陰性GPP關(guān)聯(lián)。q本實驗結(jié)果強烈支持PsV陽性GPP與PsV陰性GPP具有遺傳異質(zhì)性的觀點。q本文還分析了GPP各臨床類型DQB1等位基因的分布情況，結(jié)果各臨床類型之間的差異無統(tǒng)計學(xué) 意義。中華醫(yī)生網(wǎng)收集編目 http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr- http:/www.dr-