實(shí)驗(yàn)九玻璃器皿的清洗包扎培養(yǎng)基的制備及滅菌.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)九 玻璃器皿的清洗包扎,培養(yǎng)基的配制及滅菌,一、目的要求,1、明確培養(yǎng)基的配制原理。 2、通過(guò)對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制,掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。 3、了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍 4、了解干熱滅菌的原理和應(yīng)用范圍。 5、了解紫外線(xiàn)滅菌的原理和方法。 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟練操作。,二、基本原理,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,有時(shí)又稱(chēng)為普通培養(yǎng)基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源,磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供無(wú)機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96時(shí)溶化,一般實(shí)

2、際應(yīng)用時(shí)在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化,以免瓊脂燒焦。瓊脂在40時(shí)凝固,通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。,由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌,因此,要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性,以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下: 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 瓊脂1520g 水 1000ml pH 7476,,,干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。,,紫外線(xiàn)滅菌是用紫外線(xiàn)燈進(jìn)行的,波長(zhǎng)為200300nm的紫外線(xiàn)都有殺菌能力,其中以260nm的殺菌力最強(qiáng)。 為了加強(qiáng)紫外線(xiàn)滅菌

3、效果,在打開(kāi)紫外線(xiàn)燈以前,可在無(wú)菌室內(nèi)(或接種箱內(nèi))噴灑35的石炭酸溶液,一方面使空氣中附著有微生物的塵埃降落,另一方面也可以殺死一部分細(xì)菌。,超凈工作臺(tái)內(nèi)紫外燈(線(xiàn))滅菌,三、器材,牛肉膏,蛋白胨, NaCl,瓊脂; 1mol/L NaOH, 1mol/L HCl; 試管,三角燒瓶,燒杯,量筒,玻棒,培養(yǎng)基分裝器,扭力天平,牛角匙,高壓蒸汽滅菌鍋,pH試紙( pH 5590),棉花,牛皮紙,記號(hào)筆,麻繩,紗布等。,培養(yǎng)皿,試管,吸管,電烘箱等。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,培養(yǎng)皿(6套一包),手提式高壓蒸汽菌鍋等。 紫外線(xiàn)燈,35石炭酸或23來(lái)蘇爾溶液,牛肉膏蛋白胨平板 。,四、操作步驟,一、稱(chēng)量

4、準(zhǔn)確、迅速,一種藥品一把藥勺,勿蓋錯(cuò)藥瓶蓋 二、溶化 水的加法、加熱攪拌 三、調(diào)pH 忌調(diào)過(guò)頭后來(lái)回調(diào),培養(yǎng)基的制備,四、過(guò)濾 五、分裝 1、液體分裝:試管高度的1/4左右 三角瓶容積的1/2 2、固體分裝:試管高度的1/5左右(制斜面) 半固體:1/3左右(垂直穿刺) 馬丁氏培養(yǎng)基定容;瓶口棉塞,培養(yǎng)基的制備,六、加塞 七、包扎 八、滅菌 一般15磅(121)20分鐘 九、擺斜面 溫度、斜面長(zhǎng)度(試管的1/2) 十、無(wú)菌檢查 37培養(yǎng)2448小時(shí),常用培養(yǎng)基,一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 應(yīng)用最廣泛的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。 配方: 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaC

5、l 5.0g 水 1000ml pH 7.4-7.6,常用培養(yǎng)基,二、高氏號(hào)培養(yǎng)基 用于培養(yǎng)、觀(guān)察放線(xiàn)菌形態(tài)特征; 加入適量的抗菌物質(zhì)(抗生素、酚)用于分離放線(xiàn)菌(選擇性培養(yǎng)基)。,常用培養(yǎng)基,高氏號(hào)培養(yǎng)基配方: 可溶性淀粉 20g 按配方順序依次溶解否則 NaCl 0.5g 產(chǎn)生沉淀 KNO3 1.0g K2HPO4.3H2O 0.5g 抗生素現(xiàn)用現(xiàn)加,溫度不宜 MgSO4.7H2O 0.5g 過(guò)高否則易分解 FeSO4.7H2O 0.01g 瓊脂 15-25g 水 1000ml pH 7.4-7.6,

6、常用培養(yǎng)基,三、馬丁氏培養(yǎng)基 用于分離真菌的選擇性培養(yǎng)基 配方: KH2PO4 1.0g 另加孟加拉紅和鏈霉素 MgSO4.7H2O 0.5g 抑制細(xì)菌、放線(xiàn)菌生長(zhǎng) 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 瓊脂 10-20g 水 1000ml pH 自然,試管分裝,擺斜面,擺斜面實(shí)物圖,五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告,結(jié)果 檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底。試管清潔如何,培養(yǎng)基制備的合不合理。,玻璃器皿的清洗,器皿包扎,器皿包扎,六、思考題,(1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?為什么? (2)在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題?為什么?圖5通氣塞 A配制時(shí)紗布塞法;B滅菌時(shí)包牛皮紙;C培養(yǎng)時(shí)紗布翻出 (3)培養(yǎng)基配好后,為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的?,(4)干熱滅菌完畢后,在什么情況下才能開(kāi)箱取物?為什么? (5)高壓蒸汽滅菌開(kāi)始之前,為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡?滅菌完畢后,為什么要待壓力降到0時(shí)才能打開(kāi)排氣閥,開(kāi)蓋取物? 紫外線(xiàn)殺菌的原理是什么?,全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋,,

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