層析填料選擇.pdf

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1、層析填料選擇 Media Selection 1960 1970 1980 1990 2000 Sephadex Sepharose Sepharose CL Sepharose FF Superose Sepharose HP Superdex Sepharose Big beads Streamline Sepharose XL Mono beads SOURCE Sephacryl 新一代填料是 什么呢？ Capto sepharose 填料的基本特點(diǎn) 五大類層析技術(shù) 凝膠過(guò)濾 (GF) 離子交換 (IEX) 親和層析 (AC) 疏水層析 (HIC) 反相層析 (R

2、PC) 基架 - 顆粒越細(xì)、大小越均勻，分辨率越高，但反壓亦較高 (SOURCE基架例外 ) 物理穩(wěn)定性 - 新一代介質(zhì)較堅(jiān)固，能承受高流速，同時(shí)保持 柱床體積和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，省卻每次重新裝柱，提高重復(fù)性 化學(xué)穩(wěn)定性 - 新一代介質(zhì)能承受極端 pH，高鹽度，促溶劑 和有機(jī)溶劑，利于開發(fā)分離條件和在位清洗 (CIP)，大大延長(zhǎng) 介質(zhì)壽命并提高重復(fù)性 3 / GE / 如何選擇層析填料 按照層析技術(shù)原理分類選擇填料 層析工藝不同階段選擇填料的一般規(guī)律 根據(jù)目的物的性質(zhì)選擇填料 根據(jù)規(guī)模選擇合適的層析預(yù)裝柱 層析空柱選擇 4 / GE / 如何選擇層析填料 按照層析技術(shù)

3、原理分類選擇填料 層析工藝不同階段選擇填料的一般規(guī)律 根據(jù)目的物的性質(zhì)選擇填料 根據(jù)規(guī)模選擇合適的層析預(yù)裝柱 層析空柱選擇 5 / GE / 按照層析技術(shù)原理分類選擇填料 凝膠過(guò)濾填料選擇 離子交換填料選擇 親和填料選擇 疏水填料選擇 反相填料選擇 凝膠過(guò)濾填料選擇 離子交換填料選擇 親和填料選擇 疏水填料選擇 反相填料選擇 6 / GE / 凝膠過(guò)濾（ GF） 填料選擇 原理：是根據(jù)分子量大小分 離物質(zhì)的一種層析方法。 精度：分子量差別一倍以上 重點(diǎn)： 選擇分離范圍 類型： Sephadex、 Superdex、 Sephacryl、 S

4、epharose、 Superose Gel structure 7 / GE / Sephadex 系列填料 快速 group separation首選 Sephadex 是由 葡聚糖 交聯(lián) 環(huán)氧氯丙烷 形成 的多孔結(jié)構(gòu) Sephadex: 羥基基團(tuán)， 呈弱酸性 Sephadex : Separation Pharmacia Dextran 50周年 1959-2009 8 / GE / Sephadex 系列填料 快速 group separation首選 第一代凝膠過(guò)濾填料： G-10 分離范圍： <70

5、0 G-25 分離范圍： 1000 5000 G-50 分離范圍： 1000 30000 Sephadex LH-20分離范圍 :<5000 9 / GE / Superdex 系列填料 最受歡迎的凝膠過(guò)濾填料 特點(diǎn)： 結(jié)合了 Sephadex的高選擇性 和瓊脂糖的高物理穩(wěn)定性，機(jī)械穩(wěn) 定性好 ,高分辨率高化學(xué)穩(wěn)定性 monomer dimer mAU 0 500 1000 1500 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 ml 型號(hào) 分離范圍 Superdex peptide 100 7000 Superdex 30 prep grad

6、<10000 Superdex 75 3000 70000 Superdex 200 10K-600K 10 / GE / 1. Superdex Peptide 2. Superdex 75 3. Superdex 200 4. Sephacryl S-100 HR 5. Sephacryl S-200 HR 6. Sephacryl S-300 HR 7. Sephacryl S-400 HR Kav 1.0- 0.8- 0.6- 0.4- 0.2- 1000 10,000 100,000 1,000,000 10,000,000 1 2

7、 3 4 5 6 7 Sephacryl S系列填料 經(jīng)濟(jì)的高分辨率填料 Sephacryl S系列有 6種不 同分離范圍（ 1000-108 ），提供廣闊的選擇性 ，甚至可分 DNA質(zhì)粒和 病毒，經(jīng)濟(jì)、高效，易 于自行裝柱，是 Superdex外作下游純化 的理想介質(zhì) 11 / GE / Sepharose 系列填料 快速大分子凝膠過(guò)濾首選 Sepharose的結(jié)構(gòu)： -D-半乳糖和 3,6-脫水 -L-半乳糖交替結(jié)合所形成的線 性多聚糖。 在形成過(guò)程中由單獨(dú)的多糖鏈先形成雙螺旋，然后聚 集成膠束

8、，膠束之間形成微孔，其大小取決于膠束的 多少，即瓊脂糖的濃度。 pH為 4-9之間穩(wěn)定。 瓊脂糖凝膠對(duì)樣品的吸附 作用很小，并且機(jī)械強(qiáng)度 和孔穴穩(wěn)定性都很好。 Sepharose: Separation Pharmacia agrose 12 / GE / Sepharose 系列填料 快速大分子凝膠過(guò)濾首選 Sepharose 2B/4B/6B： 分離范圍 10K-40000K Sepharose CL 2B/4B/6B： Sepharose 6FF： 分離范圍 10KD-4MD Sephar

9、ose 4FF： 分離范圍 60KD-20MD 適合分離分子量大小差異大，對(duì)分辨率要求不高的 樣本。如核酸、蛋白多糖等。 Sepharose與 2,3-二溴丙醇共價(jià)交聯(lián)得 Sepharose CL， 適合有機(jī)溶劑純化。主要用于核酸、蛋白多糖分離等 。 適用于巨大分子如多糖疫苗、病毒、乙肝表面抗原、 DNA質(zhì)粒純化。 13 / GE / Superose系列填料 分離范圍最寬廣的高分辨率凝膠過(guò)濾填料 Superose 6分離范圍： 5k-5000K Superose 12分離范圍： 1K-300K 14 / GE / 吸附層析填料設(shè)計(jì) 基架 S O O O 配基 色譜模

10、式 選擇性 載樣量 化學(xué)穩(wěn)定性 機(jī)械穩(wěn)定性 化學(xué)穩(wěn)定性 柱效 /分辨率 表面特性 壓力 /流速特性 15 / GE / 按照層析技術(shù)原理分類選擇填料 凝膠過(guò)濾填料選擇 離子交換填料選擇 親和填料選擇 疏水填料選擇 反相填料選擇 16 / GE / 離子交換（ IEX） 最受歡迎的層析方法 原理 ：根據(jù)生物分子的表面電荷性質(zhì)進(jìn)行分離純化， 可以應(yīng)用在層析的各個(gè)階段。 重點(diǎn)： 在于選擇合適的分辨率。 17 / GE / 離子交換填料的分類 基本形式： 基架類型： Sepharose 基架 Source 基架 Ca

11、pto 基袈 Sephadex基架 纖維素基架 R（帶電配基） 18 / GE / Sepharose基架離子交換填料 市場(chǎng)主流 Q、 SP Sepharose High Performence Q、 SP、 DEAE、 CM、 ANX Sepharose Fast Flow Q、 SP Sepharose Big Beads 分 辨 率 小 大 高 低 Sreamline SP and DEAE DEAE、 CM Sepharose CL-6B 顆 粒 34um 90um 100-300um 1

12、9 / GE / 新一代層析介質(zhì)挑戰(zhàn)載量極限！ XL介質(zhì)擁有瓊脂糖骨架配合葡 萄糖長(zhǎng)鏈，大大增加高流速下 的動(dòng)力載 量大大 減少柱床體積 ， 降低 放大 工藝 時(shí)的 成本。 Q、 SP Sepharose XL 超高載量填料 XL A = M a c r o p r e p H i g h Q B = F r a c t o g e l E M D , T M A E 6 5 0 C = S u p e r Q 6 5 0 D = Q H y p e r D E = S T R E A M L I N E Q X L F = Q S e p h a

13、 r o s e X L 0 50 100 150 200 250 A B C D E F m g B S A / m l 載量可比一般介質(zhì)高達(dá) 10倍！ 1ml Q Sepharose XL 可載 250mg BSA！ 20 / GE / MacroCap SP 專為較大的生物分子設(shè)計(jì)的陽(yáng)離子交換填料 特別適合 PEG修飾后的蛋 白的純化 基架 ：交聯(lián)的烯丙基葡聚 糖與氮氮亞甲基丙烯酰胺 顆粒大?。浩骄?50um 動(dòng)態(tài)載量： 4mg/ml填料 21 / GE / Source基架離子交換填料 高流速、低反壓、高分辨率 化學(xué)

14、材質(zhì)：聚苯乙烯 /二乙烯苯 顆粒均勻，硬度大，排阻極限可達(dá) 107 3um具有極高分辨率，常用于分析 10um具有很高分辨率，用于微量制備 30um具有較高分辨率，流速快 使用流速 300 1000cm/hr 15um具有較高分辨率，用于精細(xì)純化 使用流速 30 600cm/hr Mono P： 專為層析聚焦設(shè)計(jì)的弱陰離子交換填料 22 / GE / Capto基架系列離子交換填料 新一代快流速高載量填料 改良交聯(lián)瓊脂糖 ---剛性更強(qiáng)、傳質(zhì)速度更快 線狀葡聚糖表面延伸劑 ---載量提高 顆粒大小：平均 90um,75um,40

15、um 配基： Q、 S、 DEAE、 Adhere、 MMC、 ImPres + S O 3O - 基架 表面延伸劑 配基 :磺酸乙烷基 + 23 / GE / Capto基架 剛性更強(qiáng) Capto Q and Sepharose 6 Fast Flow in BPG 300, 20 cm bed height 高流速、低反壓 高載量 24 / GE / Capto基架 剛性更強(qiáng) 更寬的工作范圍 Measured flow velocity for Capto Q at 3 bar with 20 cm bed height in Fi

16、neLINE 100: 850 cm/h Medium Bed height (cm) Flow velocity in a 1 m diameter column (cm/h) Capto 20 700 Sepharose 6 Fast Flow 20 240 Measured flow velocity for Capto Q at 3 bar with 45 cm bed height in FineLINE 100: 600 cm/h Medium Bed height (cm) Flow velocity in a 1 m diameter column (cm/h) Capto 4

17、5 350 Sepharose 6 Fast Flow 45 25 25 / GE / Capto Impres 中度以及精細(xì)純化的 快流速高分辨率填料 Capto Q / SP ImpRes: 顆粒直徑 40m， 高分辨率 良好的壓力流速性質(zhì) 工藝設(shè)計(jì)方便 較寬的操作窗口易于線性放大 高生產(chǎn)通量 提高生產(chǎn)效率 HiScreen Capto Q ImpRes HiScreen Q HP HiScreen Capto Q HiScreen Q FF 26 / GE / Capto基架系列離子交換填料 ----多模式的離子交換

18、 填料 HIC/RPC (Hydrophobicity) Ion exchange (Charge) Affinity (Biorecognition) Q Sepharose Fast Flow SP Sepharose Fast Flow Etc Phenyl Sepharose HP SOURCE 15RPC Etc MabSelect Blue Sepharose Etc 27 / GE / CaptoTM adhere 多模式新型強(qiáng)陰離子交換填料 + O O N + O H O H O H N-Benzyl-N-methylethanolamine

19、CaptoTM High flow agarose Removal of Leached Protein A Dimers and aggregtes Host cell proteins Viruses Nucleic acids ... preferably in flowthrough mode. High load in flow-through mode (100 - 300 mg MAb/ml) Contaminant removal to formulation level in two chromatographic steps 28 / GE / Capto M

20、MC 耐高鹽濃度的弱陽(yáng)離子交換凝膠 高鹽吸附 新的選擇性 29 / GE / Layered beads-Two Examples Shell Beads Ligand only in outer layer (shell) of the bead Active surface, inactive core Core Beads Ligand only in the core of the bead Inactive surface, active core 30 / GE / CaptoCore 700 5 m inactiv

21、e shell 85 m particle size N + Octylamine - Multimodal ligand Very strong protein binding Viral Particle Host Cell Proteins DNA fragments Endotoxins Detergents Benzonase Etc Capto Core 700 31 / GE / Window of Operation Load 10 m, 20 m and 80* m, nylon. 20 m is the default filter size. * For HiScale

22、 50 (and XK 50) only. Valco fittings, 1/16” on HiScale 16 and 26. 1/8” on HiScale 50. 112 / GE / 用空柱子須留意 使用調(diào)節(jié)器 ( flow adaptor ) - 保護(hù)柱床的同時(shí)更可提高 分辨 率，節(jié)省凝膠 柱子物料須生物兼容，并有尤良的化學(xué)抗性 加上裝柱器 ( packing reservoir )，可一步把凝膠裝滿柱 子， 大大提高柱效，尤其是凝膠過(guò)濾柱 柱子的過(guò)濾網(wǎng)孔徑應(yīng)該是凝膠顆粒的 1/3, 一般 10um孔 徑就 夠用，如用 SOURCE15介質(zhì)裝 HR柱和 XK柱，須換上 5um 的網(wǎng) XK柱完全配合 KTA及各種自裝的凝膠，是最佳的選擇 800免費(fèi)技術(shù)熱線 固話請(qǐng)撥 800-810-9118 手機(jī)請(qǐng)撥 400-810-9118 您強(qiáng)大的技術(shù)支持后盾 傾聽您的聲音，解決您的問(wèn)題 一直都在您的身邊 關(guān)于我們公司及產(chǎn)品的任何疑問(wèn)，都可以拿起 電話撥打 800或者 400熱線。 113 Thank you Please visit: