《自身免疫病與自身抗體的檢測.ppt》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《自身免疫病與自身抗體的檢測.ppt（72頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、自身免疫病與自身抗體的檢測 與自身免疫性疾病相關的基本概念免疫 機體識別和排除抗原性異物的功能，也就是機體免疫系統(tǒng)對抗原刺激所產(chǎn)生的以排除抗原為目的的生理過程。 體液免疫- 產(chǎn)生抗體細胞免疫-致敏淋巴細胞 與自身免疫性疾病相關的基本概念隱蔽抗原：機體有些組織成分由于解剖位置的特殊性，正常情況下終生不與免疫系統(tǒng)接觸，稱為隱蔽抗原。眼晶狀體、葡萄膜-交感性眼炎；精子男性不育。 與自身免疫性疾病相關的基本概念自身免疫：是指機體免疫系統(tǒng)對自身抗原發(fā)生免疫應答，產(chǎn)生自身抗體和（或）致敏淋巴細胞的現(xiàn)象。 與自身免疫性疾病相關的基本概念自身免疫?。?是指在各種內(nèi)外因素的作用下，自身免疫反應過強，超過了生理性
2、自身免疫反應的強度且持續(xù)相當長時間，造成對正常細胞、器官的功能與結構的破壞，呈現(xiàn)與此損傷相關的臨床表現(xiàn)及免疫學異常。 自身免疫性疾病發(fā)生的原因機體抗原特異性淋巴細胞發(fā)生異常，對正常組織發(fā)生免疫應答狀態(tài)；機體自身組織成分發(fā)生改變從而引起的免疫應答狀態(tài)。 自身免疫病的基本特征多數(shù)自身免疫病的病因不清，有些自身免疫病的發(fā)生和復發(fā)似乎與某些外因有關，但大多數(shù)自身免疫病是“自發(fā)”地發(fā)生的，目前未找到肯定的外因。 自身免疫病的基本特征血液中可檢出高滴度的自身抗體和（或）與自身組織成分起反應的致敏淋巴細胞。 自身免疫病的基本特征組織器官損傷和功能障礙的范圍取決于自身抗原分布:器官特異性自身免疫?。簶虮臼霞谞?/p>
3、腺炎，非器官特異性自身免疫?。喝缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）。 自身免疫病的基本特征自身免疫病的發(fā)生與多因素相關，包括遺傳因素、性別差異、年齡大小、氣候環(huán)境及地理位置等。 自身免疫病的基本特征遺傳因素： 強直性脊柱炎（AS）患者90%為HLA-B27陽性，然而在HLA-B27陽性的人群中發(fā)生強直性脊柱炎的可能僅為2%，而第一級HLA-B27陽性的親屬中，發(fā)生強直性脊柱炎的危險性達20%。 自身免疫病的基本特征 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的家族發(fā)病率也較高，在SLE第一代親屬中發(fā)病率達3%-5%，同胞姐妹發(fā)病率更高，特別是單卵雙胎更為常見 。在1980年的調(diào)查中35組單卵雙胎的患者中，有22組患SLE
4、，共患病率達62.9%，而雙卵雙胎8組中僅1組患病，為12.5%。 自身免疫病的基本特征性別差異和年齡大小： 強直性脊柱炎（AS）多見于年輕男性，其發(fā)病年齡從4-90歲不等，但以15-20歲多見，男女比列為9-10:1，但最近有人調(diào)查發(fā)現(xiàn)男女比列約為1.5-3:1，只不過女性 強直性脊柱炎患者起病緩慢，病情較輕，易被誤診。 自身免疫病的基本特征系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是最常見的自身免疫性疾病之一，發(fā)病的男女比列為1:9，在生肓年齡甚至可高達1:30，而且多發(fā)生于20-40歲的孕齡婦女。 自身免疫病的基本特征大多數(shù)自身免疫病呈現(xiàn)出發(fā)作緩解復發(fā)緩解遷延的臨床特征，以致成為終身痼疾。 自身免疫病的基
5、本特征免疫抑制劑（腎上腺皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺）治療有一定療效，但副作用與不良反應嚴重，停藥后常易復發(fā)。 自身免疫性疾病臨床“病譜”器官特異性 非器官特異性橋本甲狀腺炎 類天皰瘡 自身免疫性腎小球腎炎 系統(tǒng)性紅斑狼瘡原發(fā)性粘液水腫 惡性貧血 肺腎出血綜合征 干燥綜合征甲狀腺機能亢進 自身免疫性萎縮性胃炎 絕經(jīng)過早（少數(shù)病例） 類風濕關節(jié)炎 Addisino病 自身免疫性肝炎 男性不育（少數(shù)病例） 硬皮病 1型糖尿病 原發(fā)性膽汁性肝硬化 潰瘍性結腸炎 多發(fā)性肌炎/皮肌炎重癥肌無力 原發(fā)性硬化性膽管炎 克隆氏病 混合性結締組織病多發(fā)性硬化癥 自身免疫性溶血性貧血 交感性眼炎 系統(tǒng)性血管炎脫髓鞘疾病 特
6、發(fā)性血小板減少性紫癜 晶狀體源性葡萄膜炎 抗磷脂綜合征尋常天皰瘡 特發(fā)性粒細胞減少癥 藥物性狼瘡自身免疫性疾病有一百多種，發(fā)病率占世界人口的10%自身免疫性疾病幾乎遍布臨床各科（非手術科） 疑難病癥？ 常見的自身免疫性疾病圖片資料系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE） 常見的自身免疫性疾病圖片資料類風濕性關節(jié)炎（RA） 常見的自身免疫性疾病圖片資料系統(tǒng)性硬化癥（PSS） 常見的自身免疫性疾病圖片資料干燥綜合癥（SS） 常見的自身免疫性疾病圖片資料皮肌炎/多發(fā)性肌炎（DM/PM） 自身抗體的檢測自身抗體：是指抗自身細胞內(nèi)，細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白。 自身抗體的檢測自身抗體是自身免疫病的重要標記，每種自
7、身免疫病都伴有特征性的自身抗體，某些自身抗體因?qū)膊〉脑\斷具有高度的特異性，已成為診斷某些疾病的血清標記性抗體或特異性抗體，某些自身抗體與疾病的活動性有相關性，個別的自身抗體被證實參與了組織的免疫病理損傷。 自身抗體的檢測自身抗體檢測的臨床意義有助于自身免疫病的早期診斷；有助于判斷疾病的活動性和預后，觀察治療反應，指導臨床用藥；有助于進一步研究和闡明自身免疫性疾病的發(fā)病機制。 自身抗體的檢測方法間接熒光染色技術（IIF）實驗原理細胞、組織切片或純化的、生化性質(zhì)明確的物質(zhì)均可作為檢測自身抗體或病原體抗體的抗原基質(zhì)。如標本為陽性，已稀釋血清中的特異性抗體將與包被在固相上的抗原結合。第二步，已結合的
8、抗體與熒光素標記的抗人抗體結合，然后在熒光顯微鏡下觀察結果。 自身抗體的檢測方法間接熒光染色技術（IIF） 自身抗體的檢測方法間接熒光染色技術（IIF）特異性高：陰陽性結果的信號強度對比明顯。每種已結合的抗體在相應抗原的位置產(chǎn)生典型的熒光模型?；|(zhì)中抗原譜完整，可檢測多種抗體，并且檢出率高。當制備酶免試劑所需要的抗原太困難或復雜時，可選擇間接免疫熒光法。 自身抗體的檢測方法核均質(zhì)型：ds-DNA或抗組蛋白？ 自身抗體的檢測方法斑點型（S）：抗SSA、抗SSB？ 自身抗體的檢測方法著絲點型（ACA）：抗著絲點抗體。 自身抗體的檢測方法抗紡錘體抗體 自身抗體的檢測方法ELISA法檢測ANA原理：利
9、用ELISA法，搜集細胞核和細胞漿抗原，如ds-DNA、Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、centromere、Jo-1等混合液包被微孔板，檢測抗核抗體。 自身抗體的檢測方法 ELISA法與IIF法比較，有操作簡便，結果判斷較客觀，無需熒光顯微鏡等優(yōu)點，現(xiàn)在一些醫(yī)院用ELISA法來作檢測ANA的篩選方法。 自身抗體的檢測方法顆粒凝集法(PA）原理：以檢測抗脫氧核糖核蛋白體（抗DNP抗體）為例。從小牛胸腺中提取脫氧核糖核蛋白(DNP）抗原，致敏聚苯乙烯乳膠，制成抗DNP抗體乳膠凝集試劑，當血清中存在抗DNP抗體時，便與乳膠顆粒上的DNP抗原結合，使乳膠顆粒相互凝集出現(xiàn)
10、肉眼可見的凝集顆粒。 自身抗體的檢測方法金標免疫斑點法原理：斑點反應板上固相純化抗原與血清中抗體形成復合物，膠體金標記抗人IgG單抗與復合物結合，形成肉眼可見的紅色圓斑點。本法用于快速檢測血清中抗體。 自身抗體的檢測方法免疫印跡法(IB）：原理：用SOS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，將抗原按分子量大小予以分離，再將其轉(zhuǎn)移至硝酸纖維薄膜，如果受檢血清含有相應抗原的自身抗體，則在相應位置會發(fā)生免疫反應，再加酶標抗體，底物，顯色液和終止液，在抗原抗體反應的位置出現(xiàn)顯色帶，與標準帶相比較。 自身抗體的檢測方法免疫印跡法(IB）： 自身免疫病常規(guī)實驗室檢查血常規(guī)： RA：80%貧血，活動期PLT升高。 SLE：
11、WBC，PLT，Hb均可能降底。免疫血管炎：WBC增高。對藥物引起的骨髓抑制的監(jiān)測。 自身免疫病常規(guī)實驗室檢查尿常規(guī)：SLE：尿蛋白及RBC的出現(xiàn)表明腎臟損傷。 自身免疫病常規(guī)實驗室檢查肝功能：如有異常，應鑒別是何種性質(zhì)（自身免疫肝??？）病原感染常規(guī)檢查肝炎病毒：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGVEBV,TB 自身免疫病常規(guī)實驗室檢查腎功能：免疫腎病（SLE？血管炎？）肌酶：多發(fā)性肌炎/皮肌炎（PM/DM）尿酸：痛風？ 自身免疫病常規(guī)實驗室檢查免疫血清學檢查免疫球蛋白、血清蛋白電泳（高球蛋的血癥）。ESR、CRP（急性期蛋白）：對病情活動性的判斷。CH50、C3、C4：SLE活動期
12、均降底。ASO：鏈球菌感染，風濕熱。 自身免疫病常規(guī)實驗室檢查抗核抗體譜（ANAs）抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCAs）類風濕關節(jié)炎相關抗體自身免疫性肝病相關抗體抗磷脂抗體其它 抗核抗體譜(ANAS）的檢測 抗核抗體(ANA）是自身抗體中的一組抗體。ANA的研究，從發(fā)現(xiàn)狼瘡(LE）細胞算起，迄今40多年來，人們對ANA的認識不斷加深，已衍生出具有不同臨床意義的二十余種ANA，形成了抗核抗體譜(ANAS）。 抗核抗體譜(ANAS）的檢測抗核抗體：傳統(tǒng)定義：顧名思義是指抗細胞核抗原成分的自身抗體的總稱?，F(xiàn)代定義：是指抗細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。 抗核抗體譜(ANAS）的檢測ANA檢測IIF
13、法(金標準) 1、90%以上實驗室使用Hep-2細胞為底物; 2、為人來源培養(yǎng)細胞（人喉癌細胞），據(jù)有核大、細胞結構清晰特點； 3、便于結構觀察及熒光染色核型分析； 4、 核抗原豐富、特異性強、有完整的ANA抗原譜(細胞核、漿、骨架、周期）； 5、可預測分析ANA靶抗原范圍； 6、 經(jīng)驗性強。 IIF法檢測ANA陽性常見熒光染色模型細胞核 細胞漿 細胞骨架 細胞周期均質(zhì)型 核糖體型 肌動蛋白型 中心體型核膜型 線粒體型 波形蛋白型 紡錘體型斑點型 高爾基體 中間體型核仁型 溶酶體型著絲點 顆粒型（粗、細）PCNA型核（多、少）點型 抗核抗體譜(ANAS）的檢測 在實際工作中，不管用何種方法來檢
14、測ANA，實際上都是指總抗核抗體檢測。若檢測結果為陽性，則需進行分型。 抗核抗體譜(ANAS）的檢測抗核抗體(ANA)的陽性率SLE 95%PSS 70-80%MCTD 95%SS 60-70%PM/DM 50-60%RA 20-30%自身免疫性肝炎 80-90%正常人 5-20% IIF法檢測ANA陽性常見熒光染色模型細胞核 細胞漿 細胞骨架 細胞周期均質(zhì)型 核糖體型 肌動蛋白型 中心體型核膜型 線粒體型 波形蛋白型 紡錘體型斑點型 高爾基體 中間體型核仁型 溶酶體型著絲點 顆粒型（粗、細）PCNA型核（多、少）點型 抗心磷脂抗體（ACL）抗心磷脂抗體（Anti-Cardiolipin An
15、tibodies ACL）是抗磷脂抗體中的一個重要組成部分，可在多種結締組織病中出現(xiàn)，抗心磷脂抗體可分為IgA、 IgM、IgG。 抗心磷脂抗體（ACL）研究表明ACL在SLE中陽性率為30%，其次在RA中陽性率為23%，都以IgG型為主。在SLE病人當中ACL陽性者狼瘡腦病的發(fā)病率明顯高于ACL陰性患者，另外，血小板減少，血管栓塞和習慣性流產(chǎn)也與ACL抗體密切相關。 抗心磷脂抗體（ACL） 類風濕性關節(jié)炎（RA）的早期診斷類風濕因子（Rheumatoid Factor RF）是IgGFc端的自身抗體，因為它是抗體（即IgG）的對應抗體，故也稱為抗抗體。RF可以是IgG、IgA、IgM型，現(xiàn)在
16、一般說的RF是指IgM類風濕因子。 類風濕性關節(jié)炎（RA）的早期診斷 RF出現(xiàn)于的RA病人血清中，約30%的SLE、約50%的SS，部分MCTD和少數(shù)PSS病人也可呈陽性，在某些病毒、原蟲、細菌感染和腫瘤等非自身免疫病患者也可以出現(xiàn)。 類風濕性關節(jié)炎（RA）的早期診斷 RA是一種最常見的自身免疫性疾病，在全世界大約有1%的人患有此病。是以關節(jié)滑膜炎癥的慢性自身免疫性疾病，其預后變異大，輕者發(fā)生輕度關節(jié)畸形，重者則發(fā)生嚴重致死性病變。RA診斷和治療晚，則療效不滿意。早期診斷和治療，炎癥有可能發(fā)生可逆性改變，這就顯得RA的早期診斷極為重要。 類風濕性關節(jié)炎（RA）的早期診斷類風濕因子（RF）： 陽
17、性率為79%，特異性為63%?？购酥芤蜃涌贵w（APF) ： 陽性率達為81%，特異性為73-90%?？菇琴|(zhì)蛋白抗體（AKA）： 陽性率為36-69%，特異性為95-99%?？筊A33抗體： 陽性率為35%，病情相對較重。 類風濕性關節(jié)炎（RA）的早期診斷抗Sa抗體：IB法檢測的敏感性為40%，特異性為99%，陽性預報率為98%。 類風濕性關節(jié)炎（RA）的早期診斷抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體：一種遠比類風濕因子特異的RA的指標。抗CCP陽性患者比陰性的患者更容易發(fā)展成可通過放射性方法檢測到的關節(jié)損傷。 ELISA法敏感性為80%，特異性為96%。在79%的早期患者中可檢出抗CCP抗體。 類風濕性關
18、節(jié)炎（RA）的早期診斷這幾種抗體都可以在RA起病一年內(nèi)出現(xiàn)，除RF外的幾種抗體對RA的診斷具有很高的特異性，故對RA的早期診斷有很大的幫助。 抗中性粒細胞胞漿抗體譜（ANCA） ANCA是一種以中性粒細胞和單核細胞胞漿成分為靶抗原的自身抗體。80年代中期發(fā)現(xiàn)ANCA，是臨床診斷原發(fā)小血管炎的重要血清學標志。近10年來國際上對ANCA的研究進入了高潮，重要的ANCA抗原相繼發(fā)現(xiàn)。 抗中性粒細胞胞漿抗體譜（ANCA） ANCA靶抗原包括：蛋白酶3（PR3）髓過氧化物酶（MPO）人白細胞彈性a蛋白酶（HEL）乳鐵蛋白（LF）組織蛋白酶G（CG）人溶酶體相關膜蛋白2（H-LAMP2） 抗中性粒細胞胞漿
19、抗體譜（ANCA）溶菌酶（LYS）殺菌/膜通透性增高蛋白（BPI）天青殺素防御素 -浠醇酶 -葡萄糖醛酸酶 抗線粒體抗體（antimitochondrial antibodiesAMA） AMA是一種無種屬特異性和器官特異性的自身抗體。1965年WalRer等首先應用間接免疫熒光法（IIF）發(fā)現(xiàn)原發(fā)性膽汁肝硬化（PBC）患者血清中存在AMA。其后研究發(fā)現(xiàn)，PBC患者的AMA陽性率可高達90%，此項已成為PBC診斷的主要檢查項目。 AMA迄今發(fā)現(xiàn)的亞型共有9種（M1-M9），其中與PBC相關的有4種，即抗M2、M4、M8、M9。抗M2被認為是PBC敏感特異的診斷標志性抗體。M2靶抗原的主要成分為
20、丙酮酸脫氫酶復合物E2組分。高滴度的AMA-M2在PBC中陽性率大于96%，對PBC的診斷及鑒別有很高的特異性。 間接免疫熒光（IIF）是檢測ANCA最早采用的方法，應用灑精固定的白細胞制備的抗原底物片，主要表現(xiàn)為兩種陽性熒光染色型。 胞漿型ANCA（c-ANCA）：中性粒細胞胞漿彌漫性顆粒樣染色，并在核葉之間有重染者稱之。其靶抗原主要是蛋白酶3（PR3），存在于中性粒細胞嗜天青顆粒中，約占c-ANCA的80-90%。 PR3-ANCA在臨床上與韋格納氏肉芽腫（WG）密切相關，c-ANCA診斷WG的特異性大于90%。PR3-ANCA在其它原發(fā)性血管炎中也可被檢測到，如顯微鏡下多血管炎（MPA）、壞死性新月體型腎小腎炎（NCGN）、結節(jié)性多動脈炎（PAN）。 核周型ANCA（p-ANCA）：中性粒細胞核周圍發(fā)熒光者稱之。其靶抗原主要是髓過氧化物酶（MPO），存在于中性粒細胞嗜苯胺藍顆粒中，資料顯示MPO-ANCA參與血管炎相關疾病的致病機理。 Bye-bye!
自身免疫病與自身抗體的檢測.ppt
