自身免疫病與自身抗體的檢測(cè)

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1、自身免疫病與自身抗體的檢測(cè) 與自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念免疫 機(jī)體識(shí)別和排除抗原性異物的功能，也就是機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)抗原刺激所產(chǎn)生的以排除抗原為目的的生理過(guò)程。 體液免疫- 產(chǎn)生抗體細(xì)胞免疫-致敏淋巴細(xì)胞 與自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念隱蔽抗原：機(jī)體有些組織成分由于解剖位置的特殊性，正常情況下終生不與免疫系統(tǒng)接觸，稱為隱蔽抗原。眼晶狀體、葡萄膜-交感性眼炎；精子男性不育。 與自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念自身免疫：是指機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生自身抗體和（或）致敏淋巴細(xì)胞的現(xiàn)象。 與自身免疫性疾病相關(guān)的基本概念自身免疫?。?是指在各種內(nèi)外因素的作用下，自身免疫反應(yīng)過(guò)強(qiáng)，超過(guò)了生理性

2、自身免疫反應(yīng)的強(qiáng)度且持續(xù)相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間，造成對(duì)正常細(xì)胞、器官的功能與結(jié)構(gòu)的破壞，呈現(xiàn)與此損傷相關(guān)的臨床表現(xiàn)及免疫學(xué)異常。 自身免疫性疾病發(fā)生的原因機(jī)體抗原特異性淋巴細(xì)胞發(fā)生異常，對(duì)正常組織發(fā)生免疫應(yīng)答狀態(tài)；機(jī)體自身組織成分發(fā)生改變從而引起的免疫應(yīng)答狀態(tài)。 自身免疫病的基本特征多數(shù)自身免疫病的病因不清，有些自身免疫病的發(fā)生和復(fù)發(fā)似乎與某些外因有關(guān)，但大多數(shù)自身免疫病是“自發(fā)”地發(fā)生的，目前未找到肯定的外因。 自身免疫病的基本特征血液中可檢出高滴度的自身抗體和（或）與自身組織成分起反應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞。 自身免疫病的基本特征組織器官損傷和功能障礙的范圍取決于自身抗原分布:器官特異性自身免疫病：橋本氏甲狀

3、腺炎，非器官特異性自身免疫?。喝缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）。 自身免疫病的基本特征自身免疫病的發(fā)生與多因素相關(guān)，包括遺傳因素、性別差異、年齡大小、氣候環(huán)境及地理位置等。 自身免疫病的基本特征遺傳因素： 強(qiáng)直性脊柱炎（AS）患者90%為HLA-B27陽(yáng)性，然而在HLA-B27陽(yáng)性的人群中發(fā)生強(qiáng)直性脊柱炎的可能僅為2%，而第一級(jí)HLA-B27陽(yáng)性的親屬中，發(fā)生強(qiáng)直性脊柱炎的危險(xiǎn)性達(dá)20%。 自身免疫病的基本特征 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的家族發(fā)病率也較高，在SLE第一代親屬中發(fā)病率達(dá)3%-5%，同胞姐妹發(fā)病率更高，特別是單卵雙胎更為常見(jiàn) 。在1980年的調(diào)查中35組單卵雙胎的患者中，有22組患SLE

4、，共患病率達(dá)62.9%，而雙卵雙胎8組中僅1組患病，為12.5%。 自身免疫病的基本特征性別差異和年齡大?。?強(qiáng)直性脊柱炎（AS）多見(jiàn)于年輕男性，其發(fā)病年齡從4-90歲不等，但以15-20歲多見(jiàn)，男女比列為9-10:1，但最近有人調(diào)查發(fā)現(xiàn)男女比列約為1.5-3:1，只不過(guò)女性 強(qiáng)直性脊柱炎患者起病緩慢，病情較輕，易被誤診。 自身免疫病的基本特征系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是最常見(jiàn)的自身免疫性疾病之一，發(fā)病的男女比列為1:9，在生肓年齡甚至可高達(dá)1:30，而且多發(fā)生于20-40歲的孕齡婦女。 自身免疫病的基本特征大多數(shù)自身免疫病呈現(xiàn)出發(fā)作緩解復(fù)發(fā)緩解遷延的臨床特征，以致成為終身痼疾。 自身免疫病的基

5、本特征免疫抑制劑（腎上腺皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺）治療有一定療效，但副作用與不良反應(yīng)嚴(yán)重，停藥后常易復(fù)發(fā)。 自身免疫性疾病臨床“病譜”器官特異性 非器官特異性橋本甲狀腺炎 類天皰瘡 自身免疫性腎小球腎炎 系統(tǒng)性紅斑狼瘡原發(fā)性粘液水腫 惡性貧血 肺腎出血綜合征 干燥綜合征甲狀腺機(jī)能亢進(jìn) 自身免疫性萎縮性胃炎 絕經(jīng)過(guò)早（少數(shù)病例） 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 Addisino病 自身免疫性肝炎 男性不育（少數(shù)病例） 硬皮病 1型糖尿病 原發(fā)性膽汁性肝硬化 潰瘍性結(jié)腸炎 多發(fā)性肌炎/皮肌炎重癥肌無(wú)力 原發(fā)性硬化性膽管炎 克隆氏病 混合性結(jié)締組織病多發(fā)性硬化癥 自身免疫性溶血性貧血 交感性眼炎 系統(tǒng)性血管炎脫髓鞘疾病 特

6、發(fā)性血小板減少性紫癜 晶狀體源性葡萄膜炎 抗磷脂綜合征尋常天皰瘡 特發(fā)性粒細(xì)胞減少癥 藥物性狼瘡自身免疫性疾病有一百多種，發(fā)病率占世界人口的10%自身免疫性疾病幾乎遍布臨床各科（非手術(shù)科） 疑難病癥？ 常見(jiàn)的自身免疫性疾病圖片資料系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE） 常見(jiàn)的自身免疫性疾病圖片資料類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA） 常見(jiàn)的自身免疫性疾病圖片資料系統(tǒng)性硬化癥（PSS） 常見(jiàn)的自身免疫性疾病圖片資料干燥綜合癥（SS） 常見(jiàn)的自身免疫性疾病圖片資料皮肌炎/多發(fā)性肌炎（DM/PM） 自身抗體的檢測(cè)自身抗體：是指抗自身細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白。 自身抗體的檢測(cè)自身抗體是自身免疫病的重要標(biāo)記，每種自

7、身免疫病都伴有特征性的自身抗體，某些自身抗體因?qū)膊〉脑\斷具有高度的特異性，已成為診斷某些疾病的血清標(biāo)記性抗體或特異性抗體，某些自身抗體與疾病的活動(dòng)性有相關(guān)性，個(gè)別的自身抗體被證實(shí)參與了組織的免疫病理?yè)p傷。 自身抗體的檢測(cè)自身抗體檢測(cè)的臨床意義有助于自身免疫病的早期診斷；有助于判斷疾病的活動(dòng)性和預(yù)后，觀察治療反應(yīng)，指導(dǎo)臨床用藥；有助于進(jìn)一步研究和闡明自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制。 自身抗體的檢測(cè)方法間接熒光染色技術(shù)（IIF）實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞、組織切片或純化的、生化性質(zhì)明確的物質(zhì)均可作為檢測(cè)自身抗體或病原體抗體的抗原基質(zhì)。如標(biāo)本為陽(yáng)性，已稀釋血清中的特異性抗體將與包被在固相上的抗原結(jié)合。第二步，已結(jié)合的

8、抗體與熒光素標(biāo)記的抗人抗體結(jié)合，然后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。 自身抗體的檢測(cè)方法間接熒光染色技術(shù)（IIF） 自身抗體的檢測(cè)方法間接熒光染色技術(shù)（IIF）特異性高：陰陽(yáng)性結(jié)果的信號(hào)強(qiáng)度對(duì)比明顯。每種已結(jié)合的抗體在相應(yīng)抗原的位置產(chǎn)生典型的熒光模型?；|(zhì)中抗原譜完整，可檢測(cè)多種抗體，并且檢出率高。當(dāng)制備酶免試劑所需要的抗原太困難或復(fù)雜時(shí)，可選擇間接免疫熒光法。 自身抗體的檢測(cè)方法核均質(zhì)型：ds-DNA或抗組蛋白？ 自身抗體的檢測(cè)方法斑點(diǎn)型（S）：抗SSA、抗SSB？ 自身抗體的檢測(cè)方法著絲點(diǎn)型（ACA）：抗著絲點(diǎn)抗體。 自身抗體的檢測(cè)方法抗紡錘體抗體 自身抗體的檢測(cè)方法ELISA法檢測(cè)ANA原理：利

9、用ELISA法，搜集細(xì)胞核和細(xì)胞漿抗原，如ds-DNA、Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、centromere、Jo-1等混合液包被微孔板，檢測(cè)抗核抗體。 自身抗體的檢測(cè)方法 ELISA法與IIF法比較，有操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀，無(wú)需熒光顯微鏡等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)在一些醫(yī)院用ELISA法來(lái)作檢測(cè)ANA的篩選方法。 自身抗體的檢測(cè)方法顆粒凝集法(PA）原理：以檢測(cè)抗脫氧核糖核蛋白體（抗DNP抗體）為例。從小牛胸腺中提取脫氧核糖核蛋白(DNP）抗原，致敏聚苯乙烯乳膠，制成抗DNP抗體乳膠凝集試劑，當(dāng)血清中存在抗DNP抗體時(shí)，便與乳膠顆粒上的DNP抗原結(jié)合，使乳膠顆粒相互凝集出現(xiàn)

10、肉眼可見(jiàn)的凝集顆粒。 自身抗體的檢測(cè)方法金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法原理：斑點(diǎn)反應(yīng)板上固相純化抗原與血清中抗體形成復(fù)合物，膠體金標(biāo)記抗人IgG單抗與復(fù)合物結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的紅色圓斑點(diǎn)。本法用于快速檢測(cè)血清中抗體。 自身抗體的檢測(cè)方法免疫印跡法(IB）：原理：用SOS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，將抗原按分子量大小予以分離，再將其轉(zhuǎn)移至硝酸纖維薄膜，如果受檢血清含有相應(yīng)抗原的自身抗體，則在相應(yīng)位置會(huì)發(fā)生免疫反應(yīng)，再加酶標(biāo)抗體，底物，顯色液和終止液，在抗原抗體反應(yīng)的位置出現(xiàn)顯色帶，與標(biāo)準(zhǔn)帶相比較。 自身抗體的檢測(cè)方法免疫印跡法(IB）： 自身免疫病常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查血常規(guī)： RA：80%貧血，活動(dòng)期PLT升高。 SLE：

11、WBC，PLT，Hb均可能降底。免疫血管炎：WBC增高。對(duì)藥物引起的骨髓抑制的監(jiān)測(cè)。 自身免疫病常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查尿常規(guī)：SLE：尿蛋白及RBC的出現(xiàn)表明腎臟損傷。 自身免疫病常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查肝功能：如有異常，應(yīng)鑒別是何種性質(zhì)（自身免疫肝?。浚┎≡腥境Ｒ?guī)檢查肝炎病毒：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGVEBV,TB 自身免疫病常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查腎功能：免疫腎?。⊿LE？血管炎？）肌酶：多發(fā)性肌炎/皮肌炎（PM/DM）尿酸：痛風(fēng)？ 自身免疫病常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查免疫血清學(xué)檢查免疫球蛋白、血清蛋白電泳（高球蛋的血癥）。ESR、CRP（急性期蛋白）：對(duì)病情活動(dòng)性的判斷。CH50、C3、C4：SLE活動(dòng)期

12、均降底。ASO：鏈球菌感染，風(fēng)濕熱。 自身免疫病常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查抗核抗體譜（ANAs）抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCAs）類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)抗體自身免疫性肝病相關(guān)抗體抗磷脂抗體其它 抗核抗體譜(ANAS）的檢測(cè) 抗核抗體(ANA）是自身抗體中的一組抗體。ANA的研究，從發(fā)現(xiàn)狼瘡(LE）細(xì)胞算起，迄今40多年來(lái)，人們對(duì)ANA的認(rèn)識(shí)不斷加深，已衍生出具有不同臨床意義的二十余種ANA，形成了抗核抗體譜(ANAS）。 抗核抗體譜(ANAS）的檢測(cè)抗核抗體：傳統(tǒng)定義：顧名思義是指抗細(xì)胞核抗原成分的自身抗體的總稱?，F(xiàn)代定義：是指抗細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。 抗核抗體譜(ANAS）的檢測(cè)ANA檢測(cè)IIF

13、法(金標(biāo)準(zhǔn)) 1、90%以上實(shí)驗(yàn)室使用Hep-2細(xì)胞為底物; 2、為人來(lái)源培養(yǎng)細(xì)胞（人喉癌細(xì)胞），據(jù)有核大、細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰特點(diǎn)； 3、便于結(jié)構(gòu)觀察及熒光染色核型分析； 4、 核抗原豐富、特異性強(qiáng)、有完整的ANA抗原譜(細(xì)胞核、漿、骨架、周期）； 5、可預(yù)測(cè)分析ANA靶抗原范圍； 6、 經(jīng)驗(yàn)性強(qiáng)。 IIF法檢測(cè)ANA陽(yáng)性常見(jiàn)熒光染色模型細(xì)胞核 細(xì)胞漿 細(xì)胞骨架 細(xì)胞周期均質(zhì)型 核糖體型 肌動(dòng)蛋白型 中心體型核膜型 線粒體型 波形蛋白型 紡錘體型斑點(diǎn)型 高爾基體 中間體型核仁型 溶酶體型著絲點(diǎn) 顆粒型（粗、細(xì)）PCNA型核（多、少）點(diǎn)型 抗核抗體譜(ANAS）的檢測(cè) 在實(shí)際工作中，不管用何種方法來(lái)檢

14、測(cè)ANA，實(shí)際上都是指總抗核抗體檢測(cè)。若檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，則需進(jìn)行分型。 抗核抗體譜(ANAS）的檢測(cè)抗核抗體(ANA)的陽(yáng)性率SLE 95%PSS 70-80%MCTD 95%SS 60-70%PM/DM 50-60%RA 20-30%自身免疫性肝炎 80-90%正常人 5-20% IIF法檢測(cè)ANA陽(yáng)性常見(jiàn)熒光染色模型細(xì)胞核 細(xì)胞漿 細(xì)胞骨架 細(xì)胞周期均質(zhì)型 核糖體型 肌動(dòng)蛋白型 中心體型核膜型 線粒體型 波形蛋白型 紡錘體型斑點(diǎn)型 高爾基體 中間體型核仁型 溶酶體型著絲點(diǎn) 顆粒型（粗、細(xì)）PCNA型核（多、少）點(diǎn)型 抗心磷脂抗體（ACL）抗心磷脂抗體（Anti-Cardiolipin An

15、tibodies ACL）是抗磷脂抗體中的一個(gè)重要組成部分，可在多種結(jié)締組織病中出現(xiàn)，抗心磷脂抗體可分為IgA、 IgM、IgG。 抗心磷脂抗體（ACL）研究表明ACL在SLE中陽(yáng)性率為30%，其次在RA中陽(yáng)性率為23%，都以IgG型為主。在SLE病人當(dāng)中ACL陽(yáng)性者狼瘡腦病的發(fā)病率明顯高于ACL陰性患者，另外，血小板減少，血管栓塞和習(xí)慣性流產(chǎn)也與ACL抗體密切相關(guān)。 抗心磷脂抗體（ACL） 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的早期診斷類風(fēng)濕因子（Rheumatoid Factor RF）是IgGFc端的自身抗體，因?yàn)樗强贵w（即IgG）的對(duì)應(yīng)抗體，故也稱為抗抗體。RF可以是IgG、IgA、IgM型，現(xiàn)在

16、一般說(shuō)的RF是指IgM類風(fēng)濕因子。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的早期診斷 RF出現(xiàn)于的RA病人血清中，約30%的SLE、約50%的SS，部分MCTD和少數(shù)PSS病人也可呈陽(yáng)性，在某些病毒、原蟲(chóng)、細(xì)菌感染和腫瘤等非自身免疫病患者也可以出現(xiàn)。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的早期診斷 RA是一種最常見(jiàn)的自身免疫性疾病，在全世界大約有1%的人患有此病。是以關(guān)節(jié)滑膜炎癥的慢性自身免疫性疾病，其預(yù)后變異大，輕者發(fā)生輕度關(guān)節(jié)畸形，重者則發(fā)生嚴(yán)重致死性病變。RA診斷和治療晚，則療效不滿意。早期診斷和治療，炎癥有可能發(fā)生可逆性改變，這就顯得RA的早期診斷極為重要。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的早期診斷類風(fēng)濕因子（RF）： 陽(yáng)

17、性率為79%，特異性為63%?？购酥芤蜃涌贵w（APF) ： 陽(yáng)性率達(dá)為81%，特異性為73-90%?？菇琴|(zhì)蛋白抗體（AKA）： 陽(yáng)性率為36-69%，特異性為95-99%。抗RA33抗體： 陽(yáng)性率為35%，病情相對(duì)較重。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的早期診斷抗Sa抗體：IB法檢測(cè)的敏感性為40%，特異性為99%，陽(yáng)性預(yù)報(bào)率為98%。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的早期診斷抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體：一種遠(yuǎn)比類風(fēng)濕因子特異的RA的指標(biāo)?？笴CP陽(yáng)性患者比陰性的患者更容易發(fā)展成可通過(guò)放射性方法檢測(cè)到的關(guān)節(jié)損傷。 ELISA法敏感性為80%，特異性為96%。在79%的早期患者中可檢出抗CCP抗體。 類風(fēng)濕性關(guān)

18、節(jié)炎（RA）的早期診斷這幾種抗體都可以在RA起病一年內(nèi)出現(xiàn)，除RF外的幾種抗體對(duì)RA的診斷具有很高的特異性，故對(duì)RA的早期診斷有很大的幫助。 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體譜（ANCA） ANCA是一種以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿成分為靶抗原的自身抗體。80年代中期發(fā)現(xiàn)ANCA，是臨床診斷原發(fā)小血管炎的重要血清學(xué)標(biāo)志。近10年來(lái)國(guó)際上對(duì)ANCA的研究進(jìn)入了高潮，重要的ANCA抗原相繼發(fā)現(xiàn)。 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體譜（ANCA） ANCA靶抗原包括：蛋白酶3（PR3）髓過(guò)氧化物酶（MPO）人白細(xì)胞彈性a蛋白酶（HEL）乳鐵蛋白（LF）組織蛋白酶G（CG）人溶酶體相關(guān)膜蛋白2（H-LAMP2） 抗中性粒細(xì)胞胞漿

19、抗體譜（ANCA）溶菌酶（LYS）殺菌/膜通透性增高蛋白（BPI）天青殺素防御素 -浠醇酶 -葡萄糖醛酸酶 抗線粒體抗體（antimitochondrial antibodiesAMA） AMA是一種無(wú)種屬特異性和器官特異性的自身抗體。1965年WalRer等首先應(yīng)用間接免疫熒光法（IIF）發(fā)現(xiàn)原發(fā)性膽汁肝硬化（PBC）患者血清中存在AMA。其后研究發(fā)現(xiàn)，PBC患者的AMA陽(yáng)性率可高達(dá)90%，此項(xiàng)已成為PBC診斷的主要檢查項(xiàng)目。 AMA迄今發(fā)現(xiàn)的亞型共有9種（M1-M9），其中與PBC相關(guān)的有4種，即抗M2、M4、M8、M9。抗M2被認(rèn)為是PBC敏感特異的診斷標(biāo)志性抗體。M2靶抗原的主要成分為

20、丙酮酸脫氫酶復(fù)合物E2組分。高滴度的AMA-M2在PBC中陽(yáng)性率大于96%，對(duì)PBC的診斷及鑒別有很高的特異性。 間接免疫熒光（IIF）是檢測(cè)ANCA最早采用的方法，應(yīng)用灑精固定的白細(xì)胞制備的抗原底物片，主要表現(xiàn)為兩種陽(yáng)性熒光染色型。 胞漿型ANCA（c-ANCA）：中性粒細(xì)胞胞漿彌漫性顆粒樣染色，并在核葉之間有重染者稱之。其靶抗原主要是蛋白酶3（PR3），存在于中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒中，約占c-ANCA的80-90%。 PR3-ANCA在臨床上與韋格納氏肉芽腫（WG）密切相關(guān)，c-ANCA診斷WG的特異性大于90%。PR3-ANCA在其它原發(fā)性血管炎中也可被檢測(cè)到，如顯微鏡下多血管炎（MPA）、壞死性新月體型腎小腎炎（NCGN）、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎（PAN）。 核周型ANCA（p-ANCA）：中性粒細(xì)胞核周圍發(fā)熒光者稱之。其靶抗原主要是髓過(guò)氧化物酶（MPO），存在于中性粒細(xì)胞嗜苯胺藍(lán)顆粒中，資料顯示MPO-ANCA參與血管炎相關(guān)疾病的致病機(jī)理。 Bye-bye!