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1、鄰二氮菲分光光度法測鐵鄰二氮菲分光光度法測鐵FeNN32+一、實驗目的v學習分光光度法主要測量條件的選擇。v掌握鄰二氮雜菲分光光度法測定鐵的方法。v了解721型（或其他型號）分光光度計的構造和學習使用方法。二、實驗原理 分光光度法測定物質含量時的主要測量條件是通過吸收曲線的測繪而選擇的入射波長。 鄰二氮菲是測定微量鐵的一種較好的試劑，反應式如下：FeNN32+NN3Fe2+2Fe3+ + 2NH2OH = 2Fe2+ +N2 + 2H2O + 2H+FeNN32+配合物lgK穩(wěn) =21.3，摩爾吸光系數(shù)(510)=1.1104 測定時測定時pH=5較適宜。酸度高時，反應速度慢，較適宜。酸度高時
2、，反應速度慢，酸度太低，亞鐵離子易水解，影響測定。酸度太低，亞鐵離子易水解，影響測定。 三、儀器與試劑儀器：722（或其他型號）型分光光度計、容量瓶、吸量管。100mg/ml鐵標準溶液、10 mg/ml鐵標準溶液、10%鹽酸羥胺（臨時配置）、0.1%鄰二氮雜菲溶液（新配置）、1mol/L醋酸鈉溶液、鐵未知液。四、實驗操作步驟110 ug/mL鐵標準使用液和水樣的配制鐵標準使用液和水樣的配制用移液管移取用移液管移取100 ug/mL的鐵標準儲備液的鐵標準儲備液10.00 mL，置于，置于100mL容量瓶中，加入容量瓶中，加入2 mL 6 molL HCl，用蒸餾水稀釋至，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻
3、?？潭?，搖勻。2標準系列的配制標準系列的配制用刻度移液管分別移取上一步驟配制的鐵標準使用溶液（用刻度移液管分別移取上一步驟配制的鐵標準使用溶液（10ug/mL）：）：0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL依次放入依次放入7只只50mL容量瓶中，容量瓶中，分別加入分別加入10%鹽酸羥胺鹽酸羥胺溶液溶液1.0 mL，稍搖動，再加入，稍搖動，再加入0.1%鄰二氮菲鄰二氮菲溶液溶液2.0 mL及及Hac-NaAc緩沖溶液緩沖溶液5 mL，稀釋至刻度，充分搖勻。，稀釋至刻度，充分搖勻。四、實驗操作步驟3.測量條件實驗測量條件實驗吸收曲線的測繪：吸收曲線的測繪： 取上述標準系列中鐵
4、標準溶液用量為取上述標準系列中鐵標準溶液用量為6.0 mL的顯色溶液，在分光光度計上，的顯色溶液，在分光光度計上，從波長從波長440nm開始，以含鐵標準溶液開始，以含鐵標準溶液為為0.0 mL的試液為參比，每隔的試液為參比，每隔20nm測測定一次吸光度定一次吸光度A值。當臨近最大吸收波值。當臨近最大吸收波長附近時應每間隔長附近時應每間隔510nm測定一次測定一次A值。值。 以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標制以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標制出吸收曲線，從吸收曲線上確定最大出吸收曲線，從吸收曲線上確定最大吸收波長（吸收波長（ max ).A4.鐵含量的測定標準曲線的繪制：12345610 mg/ml
5、鐵標準溶液參比 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml 6 ml 以不加鐵標準以不加鐵標準溶液的試液為溶液的試液為參比液，上一參比液，上一步驟所選擇的步驟所選擇的最大吸收波長最大吸收波長為測定波長，為測定波長，依次測定標準依次測定標準系列中各溶液系列中各溶液的吸光度的吸光度A值。值。以鐵的質量濃度為橫坐標，以鐵的質量濃度為橫坐標，A值為縱坐標，繪制標準曲線。值為縱坐標，繪制標準曲線。5水樣微量鐵的測定水樣微量鐵的測定準確移取準確移取510mL（以所測吸光度在標準曲線范圍內為宜）（以所測吸光度在標準曲線范圍內為宜）未知試樣溶液，按同樣步驟和方法測定吸光度未知試樣溶液，按同樣步驟和方法測定吸光度A
6、值。在標值。在標準曲線上查出所含鐵的濃度，計算水樣中鐵的含量。準曲線上查出所含鐵的濃度，計算水樣中鐵的含量。 五、結果與數(shù)據(jù)處理1.吸收曲線的繪制：吸收曲線的繪制：將各波長及相應的吸光度將各波長及相應的吸光度列出，用坐標紙繪制吸收列出，用坐標紙繪制吸收曲線。吸光度最大時相應曲線。吸光度最大時相應的波長即為最大吸收波長，的波長即為最大吸收波長，并在圖上標出。并在圖上標出。A max v以鐵含量為坐標，吸光度為縱坐標以鐵含量為坐標，吸光度為縱坐標在坐標紙上繪制標準曲線；在坐標紙上繪制標準曲線；v由未知液的吸光度在標準曲線上查由未知液的吸光度在標準曲線上查出出5ml未知液中的鐵含量；未知液中的鐵含量
7、；v計算每毫升未知液中含多少克鐵。計算每毫升未知液中含多少克鐵。SP-72型可見分光光度計型可見分光光度計SP-72型分光光度計型分光光度計1儀器性能的檢查儀器性能的檢查 （1）接通電源，讓儀器預熱至少二十分鐘，使儀器進入熱穩(wěn)定工）接通電源，讓儀器預熱至少二十分鐘，使儀器進入熱穩(wěn)定工作狀態(tài)。作狀態(tài)。（2）儀器接通電源后，即進入自檢狀態(tài)。顯示器實時顯示儀器的）儀器接通電源后，即進入自檢狀態(tài)。顯示器實時顯示儀器的自檢狀態(tài)。當儀器發(fā)生故障時，顯示器會自動顯示故障位置。自檢結自檢狀態(tài)。當儀器發(fā)生故障時，顯示器會自動顯示故障位置。自檢結束，儀器自動尋找光源最大能量，查找完畢，儀器自動停留在束，儀器自動尋
8、找光源最大能量，查找完畢，儀器自動停留在546nm處，并自動調處，并自動調100%T和和0%T。顯示器上顯示。顯示器上顯示546nm和和“100.0%T”。儀器此時進入測試狀態(tài)。儀器此時進入測試狀態(tài)。2使用方法使用方法 （1）按）按“方式鍵方式鍵”（Mode）將測試方式設置為吸光度方）將測試方式設置為吸光度方式。式。 （2）按）按“波長設置波長設置”鍵設置想要的分析波長，如鍵設置想要的分析波長，如340nm。 （3）將參比溶液和被測溶液分別倒入比色皿中。注意比色）將參比溶液和被測溶液分別倒入比色皿中。注意比色皿內的溶液面高度不應低于皿內的溶液面高度不應低于25毫米，大約毫米，大約2.5毫升；被
9、測試的毫升；被測試的樣品中不能有氣泡和漂浮物。樣品中不能有氣泡和漂浮物。 （4）打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿）打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋。注意：一般情況下，參比樣品放在樣品槽中，蓋上樣品室蓋。注意：一般情況下，參比樣品放在樣品架的第一個槽位中；儀器所附的比色皿，其透視率是經(jīng)過測試架的第一個槽位中；儀器所附的比色皿，其透視率是經(jīng)過測試匹配的，未經(jīng)匹配處理的比色皿將影響樣品的測試精度；比色匹配的，未經(jīng)匹配處理的比色皿將影響樣品的測試精度；比色皿的透光部分表面不能有指印和溶液痕跡。皿的透光部分表面不能有指印和溶液痕跡。 （5）將參比溶液推入光路中，按）將參比溶液推入光路中，按“100%T”鍵調整零吸光鍵調整零吸光度。度。 （6）將被測溶液推或拉入光路中，此時，顯示器上所顯示）將被測溶液推或拉入光路中，此時，顯示器上所顯示的是被測樣品的吸光度數(shù)值。的是被測樣品的吸光度數(shù)值。
鄰二氮菲分光光度法測鐵722分光光度計ppt課件
