【病毒外文文獻(xiàn)】1985 Caract_risation d_une nouvelle souche de coronavirus de la bronchite infectieuse aviaire

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Bull Acad V t de France 1985 58 323 335 COMMUNICATIONS Caract risation d une nouvelle souche de coronavirus de la bronchite infectieuse aviaire par J P PICAULT G BENNEJEAN P DROUIN R L HOSPITALIER J P GILLET M GUITTET J LAMANDE et A LE BACHELIER R SUM Un coronavirus a t isol chez des poules pondeuses pr sentant des signes cliniques s v res voquant la bronchite infectieuse aviaire maladie contre laquelle el les avaient t immunis es avec un vaccin pr par partir du s rotype dominant Massachusetts ce virus pr sente des dif f rences antig niques avec les s rotypes Massachusetts et Connecticut ainsi qu avec les quatre s rotypes variants isol s par l Institut de Doorn aux Pays Bas La maladie a t reproduite chez le poulet et la poule les sympt mes respiratoires ont t s v res dans les deux cas et fa chute de ponte a t intense et persistante chez les pondeuses Le fait de d velopper une prophylaxie m dicale adapt e est discut Mots cl s Bronchite infectieuse Coronavirus S rotype Variant Poule Pathog nicit Vaccin SUMMARY CHARACTERIZATION OF A NEW CORONAVIRUS STRAIN OF POULTRY INFECTIONS BRONCHITIS A coronavirus was isolated in an infectious bronchitis IB vaccinated Massachusetts strain layers flock showing severe IB like clinical signs Minist re de J Agriculture Direction de la Qualit Services V t rinaires Laboratoire National de Pathologie Aviaire et Station Exp rimentale d Avi culture B P 9 22440 Ploufragan Laboratoire Central de Recherches V t rinaires B P 67 94703 Maisons Alfort cedex 324 BULLETIN DE L ACAD MIE The isolate is antigen ically different from the Massachusetts and the Connecticut serotypes and from the four variant serotypes isolated by the Doorn lnstitute in Holland The disease was reproduced in chickens and layers Respiratory signs were severe in both groups In layers egg drop was intense and fong lasting The eventual need for a suit able medical pr op hylaxy is discussed Key words Infectious bronchitis Coronavirus Serotype Variant Hen Pathogenicity Vaccine INTRODUCTION La bronchite infectieuse est une des dominantes pathologiques actuelles de l esp ce poule La pr vention de cette coronavirose qui fait appel l utilisation de vaccins pr par s avec le s rotype domi nant Massachusetts conna t certains checs attribu s auparavant aux conditions d utilisation du vaccin Enre 1976 et 1981 des auteurs trangers 1 2 3 4 ont isol et caract ris des coronavirus dits c variants qui seraient impliqu s dans cette pathologie Une enqu te s rologique r alis e en France a r v l la pr sence dans les trou peaux de poules et poulets 5 d anticorps neutralisant pl usieurs de ces virus c variants mais n a pas pe mis de leur attribuer un r le tiologique certain dans les cas cliniques tudi s 6 Les essais d isolement de coronavirus ont concern des cas vidents de rupture d immunit vaccinale afin d augmenter la probabilit d isoler un virus plus ou moins diff rent du s rotype Massachusetts La pr sente note rapporte les conditions d isolement en France et la carac t risation d un coronavirus int ressant de par ses propri t s anti g niques et son pouvoir pathog ne ETUDE CLINIQUE Le cas clinique qui a permis l isolement de ce coronavirus a t observ en f vrier 1984 dans un troupeau de 6 1 OO poules appar tenant plusieurs vari t s g n tiques de pondeuses en cours de testage la Station Exp rimentale d Avkulture de Ploufragan Ces poules avaient b n fici au cours de la p riode d levage des inter ventions th rapeutiques et prophylactiques classiques comportant notamment la vaccination contre la bronchite infectieuse aviaire selon le programme suivant vaccin virus vivant Massachusett s H 120 administr par n bulisation 1 et 28 jours puis rappel avec un vaccin virus Massachusetts inactiv administr par injection intramusculaire 19 semaines d ge 1 Sur le plan clinique au cours de la 4 c semaine d ge les poules ont montr des signes vidents de trach ite avec d tresse respiratoire allant jusqu la suffocation et une inspiration se faisant COMMUNICATIONS 325 le bec ouvert avec extension du cou Ces signes taient accompagn s de mouvements de t te saccad s et de d glutitions dans le but d li miner les bouchons muqueux trach aux En bruit Oe fond s entendaient des r les gras et des chants trach aux A part quelques exceptions il n y avait ni jetage nasal traduisant une rhinite ni diarrh e La morbidit fut entre 40 et 44 semaines d ge de 100 et la mortalit suivant les souches de 0 2 6 2 Sur le plan anatomo pathologique les autopsies des sujets morts ont r v l D une mani re constante une cr te violac e une cloacite catarrhale une trach ite avec inflammation catarrhale sur toute la lon gueur de la trach e avec pr sence de p t chies et d exsudats muco purulents des poumons congestionn s et d mateux des reins congestionn s hypertrophi s D une mani re inconstante au niveau de l appareil g nital la pr sence d un ou deux ovules flasques d form s parfois congestionn s une vaginite catarrhale l existence d un uf dans l oviducte n tait pas rare Entre les 44e et 4ge semaines d ge est apparue une s rie de pontes abdominales et de salpingites purulentes 3 Sur le plan des cons quences Zootechniques il a t observ une l g re baisse de consommation d aliment et surtout une alt ration des performances des pondeuses aussi bien en ce qui concerne le nombre que le poids et la qualit des ufs graphique 1 La coloration des coquilles a diminu tandis que la proportion d ufs coquilles f l es a consid rablement augment EtUDE ETIOLOGIQUE L ISOLEMENT nu VIRUS a t obtenu sur ufs de poules exemptes d organismes pathog nes sp cifi s E O P S inocul s avec le sur nageant de centrifugation des broyats de trach e et poumons de poules malades depuis 3 jours Apr s 3 passages aveugles une mortalit embryonnaire a t enregistr e 72 h apr s l inoculation Une partie des embryons morts et des survivants ont pr sent des l sions reconnues comme typiques des coronavirus savoir 326 100 IO 60 40 20 0 1 22 BULLETIN DE L ACAD MIE 1 26 1 30 1 1 34 38 Graphique 1 1 42 1 46 1 so SEMAINES D AGE POIDS 1tO D f s 60 i ss Lso 1 54 DES un Courbe de ponte et poids moyen des ufs du troupeau contamin embryons encapsul s momifi s nains sans duvet Par ailleurs la recherche d autres agents susceptibles de provoquer les symp t mes observ s notamment les para et orthomyxovirus ainsi que Je virus de la laryngo trach ite infectieuse s est av r e n gative Un antig ne pr cipitant a t pr par partir des membranes chorioallantoidiennes des ufs morts La s ropr cipitation qui est une r action de groupe ne permettant pas de diff rencier les s ro types entre eux r alis e l aide de cet antig ne et d un s rum hyperimmun monosp cifique anti virus Massachusetts de la bronchite infectieuse aviaire a donn une r action positive L observation au microscope lectronique transmission apr s coloration n gative l acide phosphotungstique des liquides allan toidiens pr lev s dans les ufs morts a r v l la pr sence de par ticules pr sentant la morphologie caract ristique des coronavirus A la suite de ces travaux pr limin aires l isolat a t baptis PL 84084 Ploufragan L N P A ann e 1984 pr l vement n 084 LE DIAGNOSTIC S ROLOGIQUE a pu tre effectu sans quivoque gr ce la pr sence dans le poulailler atteint de quelques poules E O P S introduites habituellement au moment du transfert des autres poules en b timent de ponte dans le but de d pister les TABLEAU 1 S roconversion des poules malades anticorps pr cipitants et anticorps inhibant l h magglutination 1 1 Nombre de semaines avant 1 et apr s les prelll iers sympt mes 6 4 0 5 2 i 4 1 Nombre de sujets pr sentant 1 1 2 19 14 des anticorps pr cipitants sur 15 sur 19 sur 19 sur 17 poules non E O P S 1 1 i i poules 22 89 154 45 Titres en anticorps non E O P S 10 80 20 320 40 640 20 80 inhibant l h magglutination 1 poules 8 98 E O P S 5 10 40 320 1 Moyenne g om trique et titres individuels minimaux et maximaux exprim s en inverses des dilutions de s rum 10 5 38 20 80 17 10 40 328 BULLETIN DE L ACAD MIE contaminations ventuelles Ces poules E O P S n ayant re u aucun vaccin ne pr sentaient pas d anticorps au moment de l pisode cl i nique de bronchite Leur s roconversion de m me que celle des autre s poules a t d montr e en recherchant les anticorps pr ci Pitants non s rotypiques antig ne de groupe coronavirus les anti corps inhibant l h magglutination antig ne h magglutinant Massa chusetts peu s rotypique et les anticorps neutralisants s rotypiques selon la m thode b ta antig nes viraux PL 84084 et Massachusetts tableaux 1 et 2 TABLEAU II S roconversion des poules malades anticorps neutralisants indices de s roneutralisation chez les poules d origine E O P S 10 5 semaines apr s les premiers sympt mes Virus S rum des poules d origine E O P S de r f ren ce anti Massachusetts PL 84084 6 11 2 2 4 ETUDE EXPERIMENTALE S OTYPAGE DU VIRUS Massachusetts 3 17 Un s rum anti virus PL 84084 a t pr par sur poulets E O P S dans le but de r aliser des s roneutralisations crois es destin es s rotyper le nouvel agent isol A cette fin huit coronavirus de la bronchite infectieuse aviaire et leurs anti s rums ont t utilis s les virus de r f ren ce Massachusetts et Connecticut repr sentant respectivement les s rotypes 1 et 2 de virus de la bronchite infec tieuse et 6 virus variants D207 D212 D3128 D3896 D274 et Dl466 isol s par les chercheurs de l Institut hollandais de Doorn Ces deux derniers virus bien que voisins des virus D207 et D212 ont t inclus dans le test car ils sont utilis s en Hollande pour la pr paration de nouveaux vaccins Les solutions virales ont toutes t pr ajust es un titre situ entre 106 5 et 107 DIESO par ml avant de subir des dilutions d cimales en milieu stabilisateur Ces derni res ont t ajout es part gale 0 4 ml au s rum tester lui m me pr dilu au l 2Se en milieu TABLEAU Ill Indices des s roneutralisations crois es m thode a 1 Virus Massa Connec PL 84084 D 207 D 212 D 3128 D 38 D 274 D 1466 S rum chusetts ticut 1 1 PL 84084 5 28 2 42 1 90 2 89 1 68 1 40 2 65 1 3 12 2 80 Massachusetts 5 12 1 Connecticut 1 41 4 07 D 207 2 22 4 55 D 212 1 40 5 Zl D 3128 6 1 4 31 1 D 3896 1 2 40 1 1 5 70 1 1 D 274 2 79 1 5 37 1 1 1 1 D 1466 2 9 1 640 3 330 BULLETIN DE L ACAD MIE stabilisateur Apr s 30 min d incubation une temp rature v01sme de 200 C chaque m lange a t inocul par voie allanto dienne et sous 0 1 ml 5 ufs E O P S embryonn s de 9 jours Les ufs ont t incub s la temp rature de 37 C pendant une p riode suppl mentaire de 9 jours au cours de laquelle ils ont t mir s quoti diennement Les embryons morts dans les 24 h suivant l ino culation ont t d compt s en mortalit non sp cifique Ceux morts plus tard et ou pr sentant des l sions sp cifiques de coronavirus la casse effectu e en fin de p riode d incubation ont permis la d termi nation du titre infectieux du m lange calcul selon la m thode de REED et MuENCH et par suite de l indice de neutralisation Les r sultats sont regroup s dans le tableau 3 ps r v lent une diff rence antig nique certaine entre le virus PL 84084 et les huit autres virus m me si les carts entre les indices des r actions homo logues et h t rologues ne sont pas dans l ensemble tr s lev s ce qui est peut tre d aux titres relativement faibles des anti s rums utilis s REPRODUCTION HXP RIMENTALE DE LA MALADIE Deux essais ont t r alis s en animalerie prot g e afin de conna tre le pouvoir pathog ne propre du nouvel agent isol pour le jeune et pour l adulte Chez le jeune Trente poussins E 0 P S d un jour et 30 poulets E O P S de 15 jours de souche White Leghorn ont t inocul s par instillation oculaire avec 103 3 DIESO de virus PL 84084 Les signes cliniques cons cutifs cette infection exp rimentale ont t enregistr s quotidien nement pendant une p riode de 4 semaines apr s l inoculation Les sympt mes respiratoires ont t not s individuell ement de 0 4 selon leur intensit la valeur maximale tant attribu e la d tresse respiratoire tr s intense suivie ou non de mortalit Une note moyenne a t d termin e en prenant en compte l ensemble des sujets du lot et non seulement les malades Les r sultats sont regroup s dans le tableau 4 La plupart des sujets des deux groupes ont pr sent des signes cliniques de trach o bronchite avec pour certains une d tresse respiratoire accompagn e de r les gras tr s intenses Il n a pas t observ de jetage nasal ni de diarrh e ni de mortalit Les plus jeunes poussins ont paru plus s v rement touch s que leurs a n s notamment de par l intensit des sympt mes respiratoires individuels et leur dur e particuli rement longue pour des sujets E O P S chez lesquels ne sont pas observ es les compli cations intervenan t g n ralement chez les poulets conventionnels Les l sions ont t celles d une trach o bronchite comme l a confirm e l tude anatomo pathologique de la plupart des organes COMMUNICATIONS TABLEAU IV Observations cliniques apr s infection exp rimentale chez le jeune sympt mes respiratoires Age des poussins au moment de 1 jour 15 jours l infection Pourcentage de sujets ayant pr sent 79 80 des sympt mes respiratoires Intensit moyenne des sympt mes 2 5 2 respiratoires dans le lot notation sur 4 Dur e maximale des sympt mes 22 jours 7 jours respiratoires individuels 331 pr lev s 17 jours apr s l inoculation chez un chantillon de 5 sujets par lot Les organes atteints ont t la trach e les poumons et la glande de Harder dans les deux groupes et de surcro t le rein et le foie chez deux des plus jeunes sujets Les images l sionnelles ont t celles habituellement observ es avec les souches classiques de virus de la bronchite infectieuse aviaire Chez l adulte Soixante quatre poules pondeuses de race White Leghorn ont t lev es conventionnellement de la naissance jusqu l ge de 21 semaines Elles ont re u un programme de vaccination classique et notamment le vaccin virus vivant H120 de la bronchite infectieuse administr par n bulisation l ge d un jour 4 et 12 semaines A l ge de 21 semaines elles ont t transf r es en deux animaleries prot g es raison de 32 poules par animalerie La ponte a t enre gistr e et les pourcentages de ponte calcul s hebdomadairement A l ge de 28 semaines peu apr s le pic de ponte un des deux groupes a t prouv en n bulisant pendant une quinzaine de minutes Appareil Atomist 1 500 ml d une suspension virale titrant 1 6 7 DIESO par ml du virus PL 84084 pour un volume d animalerie de 70 m3 L autre groupe a subi une n bulisation identique l aide d une solution PBS Les sympt mes respiratoires ont t enregistr s quotidiennement pendant 2 semaines apr s l preuve virulente et ont t valu s selon le syst me de notation pr c demment tab 5 Sur un plan qualitatif ces sympt mes ont t en tous points identiques ceux d j d crits chez les poussins Sur un plan quantitatif par contre deux diff rences ont t constat es les sympt mes respi ratoires ont t la fois tr s intenses et de tr s courte dur e Cela 332 BULLETIN DE L ACAD MIE TABLEAU V Observations cliniques apr s infection exp rimentale chez l adulte sympt mes respiratoires Produit n bulis Pourcentage des sujets ayant pr sent des sympt mes respiratoires Intensit moyenne des sympt mes respiratoires dans le lot notation sur 4 Dur e maximale des sympt mes respiratoires individuels Virus PL 84084 dilu en P B S 100 3 8 5 jours P B S 0 0 est peut tre d aux conditions d preuve par a rosolisation permet tant de toucher les cellules cibles des voies respiratoires sup rieures plus rapidement et plus efficacement que lors d une administration par voie oculaire La ponte a t enregistr e apr s l preuve pendant une p riode de 13 semaines en distinguant les ufs commercialisables ou pas graphique 2 Les poules infect es l aide du virus PL 84084 ont accus une chute de ponte de 42 au cours des deux premi res semaines suivant l preuve Par la suite leur taux de ponte est remont mais l augmentation parall le du nombre d ufs anormaux a maintenu le taux de production des ufs commercialisables un niveau moyen de 55 65 soit constamment 25 35 de moins que celui des t moins Ces ufs anormaux au nombre desquels n ont pas t compt s ceux coquille tach e de sang pourtant assez nombreux taient des ufs sans coquille ou coquille fragile d form e bagu e ou cercl e et des ufs de tr s petite taille Le fait que les poules de race Leghorn pondent des ufs blancs n a pas permis de prendre en compte le crit re d colo ration de la coquille qui repr sente habituellement une proportion lev e du nombre d ufs d class s dans le cas des ufs teint s C est aussi tr s probablement la raison pour laquelle le taux de ponte des ufs anormaux para t augmenter lentement car la d co loration de la coquille est la premi re anomalie de l uf se r v ler puis dispara tre apr s une preuve effectu e avec un virus clas sique de la bronchite infectieuse En ce qui concerne le poids des ufs il n a pas t effectu de mesures mais l preuve virulente a incontestablement entra n une baisse et surtout une h t rog n it Prolong e dans le poids des ufs des sujets infect s COMMUNICATIONS 333 PC PONTE EN OEUFS COMMERCIALISABLES EPREUVE PA PONTE EN OEUFS ANORMAUX PONTE VIRULENTE PT PONTE TOTALE 100 80 60 40 20 0 i NON tPROUVts 1 PC PT PC PROUV S PA PA 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 SEMAINES D AGE Graphique 2 Observations cliniques apr s infection exp rimentale che z l adulte pourcentages de p onte Outre les sympt mes respiratoi res et la chute de ponte les poules infect es ont pr sent de la diarrh e au cours des 13 semaines suivant l preuve En cours d essai les l sions ont t recherch es chez les quelques poules mortes naturellement Elles ont pr sent des ovules flasques et d form s ainsi qu une cloacite cette derni re l sion tant observ e assez fr quemment chez des poules vivantes situ es dans les cages o taient pondus la plupart des ufs tach s de sang A la fin de la p riode d observation de 13 semaines des autopsies ont t pratiqu es chez quelques poules pr sentant une diarrh e cr ayeuse et une cloacite apparemment ancienne Il a t observ une atr sie de la grappe ovarienne et du vagin une salpingite et chez un sujet pr sence au niveau de l ut rus d un uf accompagn de nodules cas eux de la taille d une noix avec adh rence entre l intestin et l oviducte Ce genre de l sions avait galement t observ lors du premier cas clinique une poque tardive corres pondant la p riode des complications secondaires 334 BULLETIN DE L ACAD MIE DISCUSSION CONCLUSION L int r t du virus PL 84084 d coule de ses caract ristiques anti g niques diff rentes du s rotype dominant Massachusetts qui sert la pr paration des vaccins contre la bronchite infectieuse et de son pouvoir pathog ne lev En ce qui concerne le premier point les diff rences entre les indices de s roneutralisation des r actions homologues et h t rologues sont nettes et ne pr tent pas confusion Les diff rences sont toujours un peu moins nettes et un peu plus irr guli res vis vis de certains des autres virus utilis s pour la d termination du s rotype de l isolat Faut il alors parler de sous type ou d un nouveau virus variant Une r ponse claire cette question n cessitera d une part de rechercher la protection crois e ventuellement conf r e par des vaccins appartenant diff rents s rotypes vis vis du virus PL 84084 et d autre part d inclure dans les tests de s roneutralisation crois e les nombreux s rotypes viraux d j connus notamment aux Etats Unis et dont le nombre lev augmente rapidement Si les essais sont en cours en ce qui concerne le premier point le second ne pourra tre envisag que dans la mesure o nous disposerons des antis rums correspondants II y a lieu toutefois de noter que les diff rents s rotypes isol s depuis une vingtaine d ann es l exception des souches hollandaises de l Jnstitut de Doorn ont plus un int r t comme souches de collection que comme souches pr sentant des propri t s int ressantes pour l levag e Par ailleurs les essais de protection crois e devront concerner aussi bien les poulets que les poules pondeuses afin de prendre en compte le double tropisme respiratoire et g nital du virus PL 84084 Une premi re r ponse d coule d j de l observation du premier pisode clinique spontan la mise en uvre d un programm