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1、實(shí)驗(yàn)五 鄰二氮菲分光光度法測(cè)定鐵的含量
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
1．掌握鄰二氮菲分光光度法測(cè)定鐵的方法;
2．了解分光光度計(jì)的構(gòu)造、性能及使用方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
鄰二氮菲（又稱鄰菲羅啉）是測(cè)定微量鐵的較好試劑，在pH=2～9的條件下，二價(jià)鐵離子與試劑生成極穩(wěn)定的橙紅色配合物。配合物的＝21.3，摩爾吸光系數(shù)＝11000 Lmol-1cm-1。
在顯色前，用鹽酸羥胺把三價(jià)鐵離子還原為二價(jià)鐵離子。
4Fe3+＋2NH2OH→4Fe2+ ＋ N2O ＋ 4H＋＋ H2O
測(cè)定時(shí)，控制溶液pH＝3較為適宜，酸度高時(shí)，反應(yīng)進(jìn)行較慢，酸度太低，則二價(jià)鐵離子水解，影響顯色。
用鄰二氮菲測(cè)定時(shí)，有
2、很多元素干擾測(cè)定，須預(yù)先進(jìn)行掩蔽或分離，如鈷、鎳、銅、鉛與試劑形成有色配合物；鎢、鉑、鎘、汞與試劑生成沉淀，還有些金屬離子如錫、鉛、鉍則在鄰二氮菲鐵配合物形成的pH范圍內(nèi)發(fā)生水解；因此當(dāng)這些離子共存時(shí)，應(yīng)注意消除它們的干擾作用。
三、儀器與試劑
1．醋酸鈉：l molL-1；
2．氫氧化鈉：0.4 molL-1；
3．鹽 酸：6 molL-1；、
4．鹽酸羥胺：100gL-1（臨時(shí)配制）；
5．鄰二氮菲（1.5gL-1）：0.l5g鄰二氮菲溶解在100mL1:1乙醇溶液中。
6．鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液
(1)100μgmL-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.8634gNH4Fe（SO4）21
3、2H20于200ml燒杯中，用6 molL-1鹽酸20 mL溶解，移至1 L容量瓶中，以水稀釋至刻度，搖勻。
(2)10 μgmL-1（即0.01 mgmL-1）鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液：用移液管吸取10ml100μgmL-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液于100ml容量瓶中，加入2ml 6 molL-1鹽酸，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。
7．儀器 7230G分光光度計(jì)及l(fā) cm比色皿。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
準(zhǔn)備工作： 打開儀器電源開關(guān)，預(yù)熱。調(diào)解儀器。
測(cè)量工作：（以通過空白溶液的透射光強(qiáng)度為I0, 通過待測(cè)液的透射光強(qiáng)度為I,由儀器給出透射比T,再由T值算出吸光度A值.）
1. 測(cè)定條件的選擇
（1）. 吸
4、收曲線的繪制：取兩個(gè)50ml容量瓶，用吸量管準(zhǔn)確吸取100μgmL-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0ml和1.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中，加入鹽酸羥胺溶液1 mL，搖勻后加入醋酸鈉溶液5 mL和鄰二氮菲溶液2 mL，以水稀釋至刻度，搖勻。放置10min后，在分光光度計(jì)上，用l cm比色皿，以試劑空白（即0.0ml鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液）為參比溶液，用不同的波長(zhǎng)，從440～560 nm之間，每隔10 nm測(cè)定一次吸光度，在最大吸收波長(zhǎng)處附近多測(cè)定幾點(diǎn)。然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制出吸收曲線，從吸收曲線上確定進(jìn)行測(cè)定鐵的適宜波長(zhǎng)（即最大吸收波長(zhǎng)）。
波長(zhǎng)（nm）
440
450
460
470
5、
480
490
494
496
498
500
吸光度
波長(zhǎng)（nm）
502
504
506
508
510
520
530
540
550
560
吸光度
（2）鄰二氮菲與鐵的配合物的穩(wěn)定性 用上面溶液繼續(xù)進(jìn)行測(cè)定，在最大吸收波長(zhǎng)510 nm處，從加人顯色劑后立即測(cè)定一次吸光度，經(jīng)15min，30 min，45 min，60 min后，各測(cè)一次吸光度。以時(shí)間（t）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制A－t曲線，從曲線上判斷配合物穩(wěn)定的情況。
（3）顯色劑濃度的影
6、響 取25 mL容量瓶7個(gè)，用吸量管準(zhǔn)確吸取100μgmL-1鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL于各容量瓶中，加入鹽酸羥胺溶液1mL搖勻，再加入l molL-1醋酸鈉5 mL，然后分別加入0.1％鄰二氮菲溶液0.3，0.6，1.0，l.5，2.0，3.0和4.0 mL，以水稀釋至刻度，搖勻。在分光光度計(jì)上，用適宜波長(zhǎng)（510 nm），1 cm比色皿，以水為參比測(cè)定不同用量顯色劑溶液的吸光度。然后以鄰二氮菲試劑加入毫升數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制A一V曲線，由曲線上確定顯色劑最佳加入量。
（4）根據(jù)上面條件實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，找出鄰二氮菲分光光度法測(cè)定鐵的測(cè)定條件并討論之。
2．鐵含量的測(cè)定
（1）
7、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取50mL容量瓶6個(gè)，分別準(zhǔn)確吸取10μgmL-l鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0和10.0 mL于各容量瓶中，各加鹽酸羥胺溶l mL，搖勻，再各加醋酸鈉溶液5 mL和鄰二氮菲溶液2mL，以水稀釋至刻度，搖勻。經(jīng)10 min放置后，在分光光度計(jì)上用l cm比色皿，以試劑空白為參比溶液，在最大吸收波長(zhǎng)（510 nm）處以水為參比測(cè)定各溶液的吸光度，以含鐵總量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
鐵標(biāo)液體積（mL）
0.00
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
鐵濃度（μg/mL）
吸光度A
（2）吸取未知液5 mL，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線相同條件和步驟測(cè)定其吸光度。根據(jù)未知液吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出未知液相對(duì)應(yīng)鐵的量，然后計(jì)算試樣中微量鐵的含量，以每升未知液中含鐵多少克表示（gL-1）。
五、數(shù)據(jù)記錄與處理
1． 記錄分光光度計(jì)型號(hào)，比色皿厚度，繪制吸收曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線；
2．計(jì)算未知液中鐵的含量，以每升未知液中含鐵多少克表示（gL-1）。
實(shí)驗(yàn)五鄰二氮菲分光光度法測(cè)定鐵的含量
