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1、 目 錄一、概 述 二、試驗(yàn)準(zhǔn)備三、試驗(yàn)步驟 四、再驗(yàn)證周期 n概 述 一、概述1、試驗(yàn)?zāi)康模河梦⑸锴秩朐囼?yàn)對(duì)凍干粉針劑車間軋蓋密封系統(tǒng)進(jìn)行挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，以確認(rèn)軋蓋后容器密封系統(tǒng)的完好性。2、試驗(yàn)概述：取西林瓶灌裝入已滅菌培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線上抽真空、壓塞、軋蓋。此后，將容器密封面浸入高濃度運(yùn)動(dòng)性菌液中，取出并檢查是否有微生物侵入，以確認(rèn)容器密封系統(tǒng)的完好性。同時(shí)，須做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，確認(rèn)培養(yǎng)基的促菌生長(zhǎng)能力。 試驗(yàn)準(zhǔn)備試驗(yàn)準(zhǔn)備洗 瓶膠塞處理培養(yǎng)基菌懸液 二、試驗(yàn)準(zhǔn)備 批量：1000瓶/批1、洗瓶: 清洗西林瓶1100只，經(jīng)305干熱滅菌12分鐘后送至灌裝間備用。2、膠塞處理: 清洗膠塞1100
2、只，經(jīng)121 濕熱滅菌20分鐘后備用。 3.1 預(yù)先對(duì)配制、灌裝系統(tǒng)按照凍干粉針劑無(wú)菌操 作要求進(jìn)行清潔、滅菌。3.2 按照培養(yǎng)基生產(chǎn)廠商要求，每批按 TSB（胰 酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基）32.3g，加1L注射用水 的比例進(jìn)行配制，加熱溶解并標(biāo)定至4.5L，置 于滅菌柜中用純蒸 汽121滅菌20min。二、試驗(yàn)準(zhǔn)備 3、配制培養(yǎng)基: 二、試驗(yàn)準(zhǔn)備 3.3將滅菌后的培養(yǎng)基（TSB配制液）通過(guò) 未裝濾膜及濾芯的過(guò)濾系統(tǒng)，在灌裝機(jī) 的數(shù)控器上調(diào)節(jié)好裝量（3.5ml）進(jìn)行灌 裝半加塞。3.4將灌裝半加塞的培養(yǎng)基在百級(jí)層流保護(hù)下轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)內(nèi)抽真空，結(jié)束后全壓塞、出箱、軋蓋。 4、制備微生物菌懸液：4.1從
3、銅綠假單胞菌（ATCC 9027）的新鮮斜面上取一整環(huán)培養(yǎng)物，分別接入含6ml無(wú)菌培養(yǎng)基的試管中，在3035下培養(yǎng)1824h。4.2將每管的培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)入含600ml相同培養(yǎng)基的容器內(nèi)，于3035下培養(yǎng)1824h。在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，能明顯見容器內(nèi)培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁。4.3在微生物侵入試驗(yàn)開始時(shí)，所用菌懸液濃度（活菌數(shù)）必須達(dá)到110 6CFU/ml。 二、試驗(yàn)準(zhǔn)備 試驗(yàn)步驟n營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)n微生物侵入試驗(yàn)n陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)n微生物侵入試驗(yàn)后 營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn) 三、試驗(yàn)步驟1.1從1000瓶培養(yǎng)基中取150瓶作為本次試驗(yàn)的試樣品。1.2用剪刀輕輕從斜側(cè)面去除至少50瓶試樣品的整個(gè)鋁蓋（注意不要破壞其密封口，將去鋁蓋時(shí)不慎
4、損壞容器密封性的所有試樣品剔除），另取80瓶帶蓋試樣品，將每一試樣品倒轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與西林瓶?jī)?nèi)表面及膠塞充分接觸，在3035豎立倒置培養(yǎng)14天。1、試驗(yàn)樣品的制備: 三、試驗(yàn)步驟1.3在培養(yǎng)期內(nèi)，當(dāng)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)任何帶蓋試樣品長(zhǎng)菌時(shí)，則試驗(yàn)無(wú)效，須棄去全部試樣品，重新從頭開始試驗(yàn)。 2.1所有試樣品培養(yǎng)14天均不長(zhǎng)菌時(shí)，從上述1.2 試樣品中隨機(jī)取20個(gè)帶蓋試樣品，每個(gè)試樣 品內(nèi)接種100CFU銅綠假單胞菌。在3035 下培養(yǎng)7天，或培養(yǎng)至所有試樣品都呈陽(yáng)性結(jié) 果。 三、試驗(yàn)步驟2、確認(rèn)培養(yǎng)基促菌生長(zhǎng)能力營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)： 2.1.1若7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長(zhǎng)良好，則容器內(nèi)培養(yǎng)基的
5、促菌生長(zhǎng)能力可判為合格。使用革蘭染色后，并置于紫外燈下，培養(yǎng)基呈藍(lán)綠色熒光，則確認(rèn)試樣品容器內(nèi)生長(zhǎng)的菌為接入的銅綠假單胞菌，即為陽(yáng)性。 2.1.2若7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣品中，微生物生長(zhǎng)條件不好或經(jīng)鑒別后受其它菌種污染，則試驗(yàn)失敗，需重新作營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)。三、試驗(yàn)步驟 3、微生物侵入試驗(yàn)操作步驟: 微生物培養(yǎng)及侵入試驗(yàn)應(yīng)在不影響生產(chǎn)環(huán)境的地方（中心化驗(yàn)室陽(yáng)性室）進(jìn)行。三、試驗(yàn)步驟 3.1 將新鮮的銅綠假單胞菌（ATCC 9027）的 菌懸液倒入適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，用試管架固定 試樣品。三、試驗(yàn)步驟3.2 從上述1.2試樣品中再取50只帶蓋試樣品為 A組，另取25個(gè)去蓋 試樣品為B組，均倒 置于
6、菌懸液中,使試樣容器內(nèi)的培養(yǎng)基充 分接觸封口內(nèi)表面，試樣品的頸部及封口 的外表面應(yīng)完全浸泡在菌懸液中（如下圖 1所示）。 圖1微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)示意圖三、試驗(yàn)步驟 3.3將A組和B組試樣品在菌懸液中持續(xù)浸泡約4h后，取出試樣品，擦干試樣品容器外殘余的菌懸液，其外表用含0.5%過(guò)乙酸的70%異丙醇消毒五分鐘（注意不要破壞其密封口）。三、試驗(yàn)步驟3.4從1.2試樣品中另取有蓋和去蓋的培養(yǎng)基各兩 個(gè)，做陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照試樣品不經(jīng)菌懸 液浸泡，其外表用含0.5%過(guò)乙酸的70%異丙 醇消毒五分鐘后，接種10100CFU銅綠假單 胞菌，按營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)的步驟進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。 3.5將消毒后的試樣品放入塑料袋中，
7、置3035下培養(yǎng)7天。檢查試樣品內(nèi)微生物生長(zhǎng)情況，有生長(zhǎng)記作“”，無(wú)生長(zhǎng)記作“”。三、試驗(yàn)步驟3.5.1如果試樣品長(zhǎng)菌，則按照2.1所述方法確認(rèn)生 長(zhǎng)菌是挑戰(zhàn)微生物銅綠假單胞菌。 3.5.2 如果所有試樣品均不長(zhǎng)菌，則從浸過(guò)菌懸液的A組試樣中取10甁，B組試樣中取5瓶，按2.所述方法對(duì)試樣品進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)性試驗(yàn)。 三、試驗(yàn)步驟3.6微生物侵入試驗(yàn)用菌懸液經(jīng)滅菌后丟棄。 4.1步驟2、3.4中進(jìn)行的營(yíng)養(yǎng)試驗(yàn)和3.5.2中進(jìn)行的陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)都合格，微生物侵入試驗(yàn)才有效。三、試驗(yàn)步驟4、結(jié)果評(píng)價(jià): 4.2挑戰(zhàn)試驗(yàn)中A組和B組如有長(zhǎng)菌，需記錄長(zhǎng)菌的試樣數(shù)。在A組中如出現(xiàn)長(zhǎng)菌，則須按下述要求作進(jìn)一步調(diào)查。4.2.1仔細(xì)去除微生物生長(zhǎng)的容器的蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。 4.2.2將觀察到試樣品封口的缺陷，采用拍照或其他適當(dāng)方式詳細(xì)記錄。三、試驗(yàn)步驟 4.3如果任何挑戰(zhàn)試驗(yàn)中長(zhǎng)菌的試樣品不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器密封性挑戰(zhàn)試驗(yàn)作失敗論。 三、試驗(yàn)步驟 5、貯存穩(wěn)定性:5.1將剩余未經(jīng)挑戰(zhàn)試驗(yàn)的容器放入箱中，保存在室溫黑暗處；5.2在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔（如12個(gè)月、24個(gè)月）取出一些容器，重復(fù)挑戰(zhàn)性試驗(yàn)（步驟同上）。 三、試驗(yàn)步驟 再驗(yàn)證周期 四、再驗(yàn)證周期1、當(dāng)軋蓋設(shè)備發(fā)生變化時(shí)應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證;2、改變膠塞、西林瓶及鋁蓋尺寸、材質(zhì) 時(shí)應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。
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