2015-2016學(xué)年高中生物 專題一 基因工程 第1課時 DNA重組技術(shù)的基本工具學(xué)案 新人教版選修3

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1、 專題一 基因工程 第1課時 DNA重組技術(shù)的基本工具 [目標導(dǎo)讀] 1.結(jié)合課本插圖,簡述DNA重組技術(shù)所需三種基本工具的作用。2.結(jié)合教材P6圖1-5,簡述基因工程中載體需要具備的條件。 [重難點擊] DNA重組技術(shù)三種基本工具的作用和特點。 1.DNA分子的組成 2.DNA的平面結(jié)構(gòu) (1)配對的堿基,A與T之間形成兩個氫鍵,G與C之間形成三個氫鍵。C—G比例越大,DNA分子結(jié)構(gòu)越穩(wěn)定。 (2)脫氧核苷酸聚合形成長鏈的過程中產(chǎn)生水,即脫氧核苷酸→DNA+H2O。 (3)○和之間的化學(xué)鍵為磷酸二酯鍵。 (4)?—?之間的化學(xué)鍵為氫鍵,可用解旋酶斷裂,也可加

2、熱斷裂。 (5)每個脫氧核糖連接著2個磷酸,分別在3號、5號碳原子上相連接。 3.基因與DNA的關(guān)系 從上圖可知,S基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段。 [課堂導(dǎo)入]  如圖為“黃金水稻”,是將類胡蘿卜素基因?qū)胨緝?nèi)培育而成的,這種技術(shù)就是基因工程,是一種精細的DNA拼接技術(shù),需要一些特殊的工具才能進行,今天我們就來學(xué)習(xí)DNA重組技術(shù)的基本工具。 探究點一 基因工程的概念及工具酶 1.基因工程的概念 圖1為我國擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉,就是通過精心設(shè)計,用“分子工具”構(gòu)建成的。培育抗蟲棉首先要在體外對含有抗蟲基因的DNA分子進行“切割”、改造、修飾和“拼接”,

3、然后,導(dǎo)入棉花體細胞內(nèi),并使重組DNA在細胞中表達。 由上述資料填寫下表,理解基因工程的概念。 操作對象 基因(DNA) 操作環(huán)境 生物體外 操作水平 DNA分子水平 技術(shù)手段 DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù) 目的 創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品 2.基因工程的工具酶 (1)“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶) ①來源:主要是從原核生物中分離純化出來的。 ②功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。 小貼士 限制酶所識別序列的特點 呈現(xiàn)堿基互補對稱,無論是奇數(shù)個堿基還是偶數(shù)個

4、堿基,都可以找到一條中心軸線,如圖所示,中心軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。如GCCG以中心線為軸,兩側(cè)堿基互補對稱;CGCGATGCGC以AT為軸,兩側(cè)堿基互補對稱。③作用結(jié)果:形成DNA片段末端。 a.黏性末端 是限制性核酸內(nèi)切酶在識別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時形成的,如圖所示。 b.平末端 是限制性核酸內(nèi)切酶在識別序列的中心軸線處切開時形成的,如圖所示。 ④觀察圖2,說明限制酶切割的位置在2、4(處)。 (2)“分子縫合針”——DNA連接酶 ①作用:將雙鏈DNA片段之間的磷酸二酯鍵連接起來。 ②DNA連接酶種類和作用的區(qū)別

5、 種類 來源 作用 E·coli DNA 連接酶 大腸桿菌 縫合黏性末端被切開的磷酸二酯鍵,不能連接平末端 T4 DNA連接酶 T4噬菌體 縫合黏性末端和平末端,但平末端之間連接的效率比較低 歸納提煉 1.DNA連接酶與限制性核酸內(nèi)切酶的比較 (1)區(qū)別 作用 應(yīng)用 限制性核酸內(nèi)切酶 使特定部位的磷酸二酯鍵斷裂 用于提取目的基因和切割載體 DNA連接酶 在DNA片段之間重新形成磷酸二酯鍵 用于基因表達載體的構(gòu)建 (2)兩者的關(guān)系可表示為: 2.DNA連接酶與DNA聚合酶的比較 DNA連接酶 DNA聚合酶 相同點 催化兩個脫氧核苷酸

6、之間形成磷酸二酯鍵 不 同 點 模板 不需要模板 需要DNA的一條鏈為模板 作用對象 游離的DNA片段 單個的脫氧核苷酸 作用結(jié)果 形成完整的DNA分子 形成DNA的一條鏈 用途 基因工程 DNA分子復(fù)制 活學(xué)活用 1.下圖為DNA分子的切割和連接過程,據(jù)圖回答下列問題。 (1)EcoRⅠ是一種____________酶,其識別序列是________________,切割位點是___________與___________之間的___________鍵。切割結(jié)果產(chǎn)生的DNA末端片段形式為_____________。 (2)不同來源的DNA片段結(jié)合,在這

7、里需要的酶是__________連接酶,此酶的作用是在__________和________之間形成__________鍵而起縫合作用的。還有一種連接平末端的連接酶是__________。 答案 (1)限制性核酸內(nèi)切 GAATTC 鳥嘌呤脫氧核苷酸 腺嘌呤脫氧核苷酸 磷酸二酯 黏性末端 (2)E·coliDNA 鳥嘌呤脫氧核苷酸 腺嘌呤脫氧核苷酸 磷酸二酯 T4DNA連接酶 解析 限制酶能識別特定的核苷酸序列(堿基序列),并使兩個特定核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂,DNA連接酶的作用是將不同來源的DNA片段連接起來。 方法鏈接 與DNA分子有關(guān)的四種酶的作用部位圖解: (1)作用于a

8、(磷酸二酯鍵)的酶:限制酶、DNA連接酶和DNA聚合酶。 (2)作用于b(氫鍵)的酶:解旋酶。 探究點二 “分子運輸車”——載體 載體的作用是作為運載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細胞中去,并在受體細胞內(nèi)大量復(fù)制。常用的載體有細菌的質(zhì)粒、病毒等。 1.質(zhì)粒來源于許多細菌和酵母菌等生物,是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細菌擬核DNA之外,并具有自我復(fù)制能力的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子。 2.作為載體的條件有: (1)載體DNA要攜帶目的基因,因此要求載體DNA必須有一個至多個限制酶切割位點。 (2)目的基因進入受體細胞后要進行DNA復(fù)制,因此要求攜帶目的基因的載體具有自我復(fù)制的特點

9、或能整合到染色體DNA上,隨染色體DNA進行同步復(fù)制。 (3)目的基因進入受體細胞后要進行鑒定和選擇,一般利用質(zhì)粒上特殊的標記基因。 (4)霍亂弧菌有強烈的致病性,也含有質(zhì)粒,但一般不用來做載體。因此,我們選擇的載體應(yīng)該對受體細胞無害。 3.常用載體種類 質(zhì)粒、λ噬菌體的洐生物和滅活的動植物病毒等。其中最常用的載體是質(zhì)粒。 歸納提煉 細胞膜上的載體與基因工程中的載體的區(qū)別 (1)化學(xué)本質(zhì)不同:細胞膜上的載體化學(xué)成分是蛋白質(zhì);基因工程中的載體可能是物質(zhì),如質(zhì)粒(DNA)、λ噬菌體的衍生物,也可能是生物,如動植物病毒等。 (2)功能不同:細胞膜上的載體功能是協(xié)助細胞膜控制物質(zhì)進出細

10、胞;基因工程中的載體是一種“分子運輸車”,把目的基因?qū)胧荏w細胞。 活學(xué)活用 2.限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的識別序列及切割位點分別是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。如圖表示四種質(zhì)粒和目的基因,其中,箭頭所指部位為限制酶的識別位點,質(zhì)粒的陰影部分表示標記基因。適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是(  ) 問題導(dǎo)析 (1)據(jù)圖可知,能識別此目的基因的兩端序列的是限制酶MunⅠ和EcoRI。 (2)質(zhì)粒B上無標記基因,不適合作為載體;質(zhì)粒A和C都有上述限制酶的識別位點,但是C的切割位點在標記基因上。 答案 A 解析 由圖可知,質(zhì)粒B上無標記基因,不適合作為載體;質(zhì)粒C

11、和D的標記基因上都有限制酶的識別位點;只有質(zhì)粒A上既有標記基因,且MunⅠ的切割位點不在標記基因上。 基因工程的基本工具 ①限制性核,酸內(nèi)切酶(分子手術(shù)刀) ⑥D(zhuǎn)NA連接酶(分子縫合針) ⑧載體(分子運輸車) 1.下圖表示一項重要的生物技術(shù),對圖中物質(zhì)a、b、c、d的描述,正確的是(  ) A.通常情況下,a與d需要用同一種限制酶進行切割 B.b能識別特定的核苷酸序列,并將A與T之間的氫鍵切開 C.c連接雙鏈間的A和T,使黏性末端處堿基互補配對 D.b代表的是限制性核酸內(nèi)切酶,c代表的是RNA聚合酶 答案 A 解析 b是限制性核酸內(nèi)切酶,能識別特定的核苷酸序列

12、并使DNA分子的每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,而不是使氫鍵斷開;c是DNA連接酶,能連接兩個DNA片段。 2.關(guān)于限制酶識別序列和切開部位的特點,敘述錯誤的是(  ) A.所識別的序列都可以找到一條中軸線 B.中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列 C.只識別和切割特定的核苷酸序列 D.在任何部位都能將DNA切開 答案 D 解析 一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列,并且能在特定的位點上切割DNA分子。 3.質(zhì)粒之所以能做基因工程的載體,是由于它(  ) A.含蛋白質(zhì),從而能完成生命活動 B.能夠自我復(fù)制,且能保持連續(xù)性 C.含RNA,能

13、夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成 D.具有環(huán)狀結(jié)構(gòu),能夠攜帶目的基因 答案 B 解析 質(zhì)粒存在于細菌和酵母菌等微生物中,是一種很小的環(huán)狀DNA分子,其上有標記基因,便于檢測。質(zhì)粒在受體細胞中,能隨受體細胞DNA的復(fù)制而復(fù)制,進行目的基因的擴增和表達。 4.通過DNA重組技術(shù)使原有基因得以改造的動物稱為轉(zhuǎn)基因動物。運用這一技術(shù)使羊奶中含有人體蛋白質(zhì),下圖表示了這一技術(shù)的基本過程,在該工程中所用的基因“剪刀”能識別的序列和切點是—G↓GATCC—,請回答下列問題。 (1)從羊染色體中“剪下”羊蛋白質(zhì)基因的酶是________________。人體蛋白質(zhì)基因“插入”后連接在羊體細胞染色體中時需要的酶

14、是________________。 (2)請畫出質(zhì)粒被切割形成黏性末端的過程圖。 (3)人體蛋白質(zhì)基因之所以能“插入”到羊的染色體內(nèi),原因是_______________________, “插入”時用的工具是________,其種類有__________________________。 答案 (1)限制酶 DNA連接酶 (2) (3)基因的組成、堿基配對方式和空間結(jié)構(gòu)是相同的 載體 質(zhì)粒、動植物病毒、λ噬菌體的衍生物等 解析 基因工程所用的工具酶是限制酶和DNA連接酶,不同生物的基因之所以能整合在一起,是因為基因的組成、堿基配對方式和空間結(jié)構(gòu)是相同的。將目的基因?qū)胧荏w

15、細胞,離不開載體的協(xié)助,基因工程中常用的載體除質(zhì)粒外,還有動植物病毒、λ噬菌體的衍生物等。 基礎(chǔ)過關(guān) 知識點一 基因工程的概念和工具酶 1.實施基因工程的最終目的是(  ) A.提取生物體的DNA分子 B.對DNA分子進行人工剪切 C.在生物體外對DNA分子進行改造 D.創(chuàng)造符合人們需要的新生物類型和生物產(chǎn)品 答案 D 解析 A、B和C三項均為基因工程操作的具體內(nèi)容,但不是基因工程的目的。實施基因工程的最終目的是通過基因操作定向改造生物的遺傳物質(zhì),創(chuàng)造符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。 2.下列關(guān)于限制酶的敘述中,錯誤的是(  ) A.它能在特殊位點切割DNA分子

16、 B.同一種限制酶切割不同的DNA產(chǎn)生的黏性末端能夠很好地進行堿基配對 C.它能任意切割DNA,從而產(chǎn)生大量DNA片段 D.每一種限制酶只能識別特定的核苷酸序列 答案 C 解析 限制酶是基因工程的重要工具之一。每種限制酶只能識別特定的核苷酸序列,并在特定的位點上切割DNA分子。同一種限制酶切割不同的DNA產(chǎn)生的黏性末端能進行互補配對。 3.下列有關(guān)限制酶的說法,正確的是(  ) A.限制酶主要是從真核生物中分離出來的 B.限制酶的識別序列只能由6個核苷酸組成 C.限制酶能識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 D.限

17、制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端都為黏性末端 答案 C 解析 限制酶主要存在于微生物中。一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列,并且能在特定的位點上切割DNA分子,切開后形成兩種末端——黏性末端和平末端。少數(shù)限制酶的識別序列由4、5或8個核苷酸組成。 4.下列關(guān)于DNA連接酶的敘述,不正確的是(  ) A.催化相同黏性末端的DNA片段之間的連接 B.催化相同平末端的DNA片段之間的連接 C.催化兩個黏性末端互補堿基氫鍵的形成 D.催化DNA分子兩條鏈的脫氧核糖與磷酸之間磷酸二酯鍵的形成 答案 C 解析 氫鍵是分子間作用力,其斷裂和形成與DNA連接酶無關(guān)。 5.如圖,兩個核酸片段

18、在適宜條件下,經(jīng)X酶的催化作用,發(fā)生下述變化,則此酶是(  ) A.DNA連接酶 B.RNA聚合酶 C.DNA聚合酶 D.限制酶 答案 A 解析 DNA連接酶可以將雙鏈DNA片段互補的黏性末端連接起來。 知識點二 載體 6.作為基因工程中的“分子運輸車”——載體,應(yīng)具備的條件是(  ) ①必須有一個至多個限制酶的切割位點,以便目的基因可以插入到載體上 ②載體必須具備自我復(fù)制的能力,或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復(fù)制而同步復(fù)制?、郾仨殠в袠擞浕?,以便進行重組后的篩選 ④必須是安全的,不會對受體細胞有害,或不能進入到除受體細胞外的其他生物細胞中去?、荽笮?yīng)合適

19、,太大則不易操作 A.①②③④ B.①②③⑤ C.①②④⑤ D.①②③④⑤ 答案 D 解析 基因操作中要使載體攜帶目的基因,其上必須有一個至多個限制酶的切割位點,以便目的基因可以插入到載體上;載體必須具備自我復(fù)制的能力,或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復(fù)制而同步復(fù)制;必須帶有標記基因,以便進行重組后的篩選;必須是安全的;大小應(yīng)合適,太大則不易操作。 7.下列哪項不是基因工程中經(jīng)常使用的載體(  ) A.細菌質(zhì)粒 B.λ噬菌體的衍生物 C.動植物病毒 D.細菌擬核區(qū)的DNA 答案 D 解析 細菌擬核內(nèi)的DNA分子不具備載體的基本條件,不能用于基因工程。 8.

20、下列有關(guān)細菌質(zhì)粒的敘述,正確的是(  ) A.質(zhì)粒是存在于細菌細胞中的一種顆粒狀的細胞器 B.質(zhì)粒是細菌細胞中能自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子 C.質(zhì)粒只有在侵入宿主細胞后在宿主細胞內(nèi)復(fù)制 D.細菌質(zhì)粒的復(fù)制過程一定是在宿主細胞外獨立進行的 答案 B 解析 質(zhì)粒是細菌細胞質(zhì)中能自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子,可以在細菌細胞內(nèi)或宿主細胞內(nèi)復(fù)制。 能力提升 9.下列對基因工程的理解,正確的是(  ) ①它是一種按照人們的意愿,定向改造生物遺傳特性的工程 ②對基因進行人為改造?、凼求w外進行的人為的基因重組 ④在實驗室內(nèi),利用相關(guān)的酶和原料合成DNA ⑤主要技術(shù)為體外DNA重組技術(shù)和轉(zhuǎn)基

21、因技術(shù) ⑥在DNA分子水平進行操作 ⑦一旦成功,便可遺傳 A.①②③④⑤⑥ B.①③④⑤⑥⑦ C.①②③⑤⑥⑦ D.①③⑤⑥⑦ 答案 D 解析 基因工程可以對生物的基因進行改造和重新組合,然后導(dǎo)入受體細胞內(nèi)進行無性繁殖,使重組基因在受體細胞內(nèi)表達,產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物,而不是對基因進行人為改造。 10.基因工程在操作過程中需要限制酶、DNA連接酶、載體三種工具。以下有關(guān)基本工具的敘述,正確的是(  ) A.所有限制酶的識別序列均由6個核苷酸組成 B.所有DNA連接酶均能連接黏性末端和平末端 C.真正被用作載體的質(zhì)粒都是天然質(zhì)粒 D.原核生物內(nèi)的限制酶可切割入侵的D

22、NA分子而保護自身 答案 D 解析 大多數(shù)限制酶的識別序列由6個核苷酸組成,也有少數(shù)限制酶的識別序列由4、5或8個核苷酸組成;DNA連接酶包括E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶,前者只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端連接起來;在基因工程操作中真正被用作載體的質(zhì)粒,都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進行過人工改造的。 11.現(xiàn)有一長度為1 000堿基對(bp)的DNA分子,用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ 單獨酶切后得到的DNA分子仍是1 000 bp,用Kpn Ⅰ 單獨酶切得到400 bp和600 bp兩種長度的DNA分子,用EcoRⅠ、KpnⅠ同時酶切后得到200 bp和600 bp兩種長度的

23、DNA分子。該DNA分子的酶切圖譜正確的是(  ) 答案 D 解析 由題干條件可知用EcoRⅠ酶切后,并不能將DNA分為兩段,故可判斷為環(huán)狀DNA,再根據(jù)“用EcoRⅠ、KpnⅠ同時酶切后得到200 bp和600 bp兩種長度的DNA分子”可得到答案D。 12.下列黏性末端是由同一種限制酶切割而成的是(  ) ①TCGGACTTAA ②ACTGTCCA ③AATTCG ④AGCTTCAG A.①② B.①③ C.①④ D.②③ 答案 B 解析 只有①和③兩個黏性末端的堿基是互補的,可以說明一般情況下是由同一種限制酶切開。 13.基因工程中,需要使用限制酶切割

24、目的基因和質(zhì)粒,便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—,限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。 (1)根據(jù)已知條件和圖回答下列問題: ①上述質(zhì)粒用限制酶________切割,目的基因用限制酶__________切割。 ②將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處,還要加入適量的__________。 ③請指出質(zhì)粒上至少要有一個標記基因的理由:______________________________ ________________________________________________________________________。 (

25、2)不同生物的基因可以拼接的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是____________________________________ ________________________________________________________________________。 答案 (1)①Ⅰ?、颉、贒NA連接酶?、蹤z測重組質(zhì)粒(或目的基因)是否導(dǎo)入受體細胞 (2)DNA結(jié)構(gòu)基本相同(其他合理答案均可) 解析 要形成重組質(zhì)粒,質(zhì)粒只能出現(xiàn)一個切口,并且至少保留一個標記基因,因序列在GeneⅡ上,因此用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒,保留GeneⅠ標記基因;目的基因必須切割兩次,切割后產(chǎn)生的黏性末端能與質(zhì)粒的黏性末端互補

26、,序列中有酶Ⅱ的切割序列,因此用酶Ⅱ,產(chǎn)生的末端互補。 14.下圖表示兩種限制性核酸內(nèi)切酶識別DNA分子特定序列,并在特定位點對DNA進行切割的示意圖,請回答以下問題: 甲: 5′—T—C—G—A—A—T—T—C- 3′—A—G—C—T—T—A—A—G-     ↓ —T—C—G—    —A—A—T—T—C— —A—G—C—T—T—A—A—    —G— 乙: 5′—G—T—T—A—A—C— 3′—C—A—A—T—T—G—     ↓ —G—T—T—   —A—A—C— —C—A—A—   —T—T—G— (1)圖中甲和乙代表________

27、________________________________________________。 (2)EcoRⅠ、HpaⅠ代表____________________________________________________。 (3)圖中甲和乙經(jīng)過相應(yīng)操作均形成兩個片段,切口的類型分別為______________、____________。 (4)由圖解可以看出,限制酶的作用特點是____________________________________ _____________________________________________________________

28、___________。 答案 (1)有特殊脫氧核苷酸序列的DNA片段 (2)兩種不同的限制酶 (3)黏性末端 平末端 (4)每種限制酶都能識別特定的脫氧核苷酸序列并從特定的位點將DNA分子切開 解析 從圖解可以看出,甲和乙代表的是不同的DNA片段,在相應(yīng)的限制酶(EcoRⅠ、HpaⅠ)的作用下,在特定的位點被剪切成兩部分。前者是在識別序列的中心軸線兩側(cè)分別切開,形成的末端是黏性末端;后者是在識別序列的中心軸線處切開,則產(chǎn)生平末端。EcoRⅠ能將甲片段以圖中方式剪切成兩部分,但不能將乙片段剪切成兩部分,說明每種限制酶的識別序列和切點具有高度的專一性。 個性拓展 15.根據(jù)模擬制作重

29、組DNA分子的活動,甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRⅠ酶(識別序列為GAATTC,并在G與A之間切開)切后,即可獲得所需的目的基因和質(zhì)粒,回答以下問題: (1)綠色硬紙板(甲DNA分子)的堿基序列為: ……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…… ……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG…… 紅色硬紙板(乙DNA分子)的堿基序列為: ……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC…… ……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG…… 其中,________DNA分子含有“目的基因”,________

30、__DNA分子是“質(zhì)粒”。 (2)用“剪刀”進行切割。酶切割位點在______(“a處”還是“b處”),請用“‖”在甲、乙兩DNA分子上標出EcoRⅠ酶的作用位點。 (3)你模擬插入的DNA片段能稱得上一個基因嗎?____________________。 答案 (1)乙 甲 (2)a處 綠色硬紙板(甲DNA分子)的堿基序列為: ……ATAGCATGCTATCCATG ‖AATTCGGCATAC…… ……TATCGTACGATAGGTACTTAA ‖GCCGTATG…… 紅色硬紙板(乙DNA分子)的堿基序列為: ……TCCTAG‖AATTCTCGGTATG‖AATTCCATAC…… ……AGGATCTTAA‖GAGCCATACTTAA‖GGTATG…… (3)不能 13

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