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1、鄰二氮菲分光光度法測(cè)鐵 F e N N 3 2 + 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)分光光度法主要測(cè)量條件的選擇。 掌握鄰二氮雜菲分光光度法測(cè)定鐵的方法。 了解 721型（或其他型號(hào)）分光光度計(jì)的構(gòu) 造和學(xué)習(xí)使用方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理 分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)的主要測(cè)量條 件是通過(guò)吸收曲線的測(cè)繪而選擇的入射波長(zhǎng)。 鄰二氮菲是測(cè)定微量鐵的一種較好的試劑， 反應(yīng)式如下： F e N N 3 2 + N N 3F e 2 + + 2 F e 3 + + 2 N H 2 O H = 2 F e 2 + + N 2 + 2 H 2 O + 2 H + F eNN 3 2+ 配合物 lgK穩(wěn) =21.3，摩爾吸光系數(shù) (
2、510)=1.1 104 測(cè)定時(shí) pH=5較適宜。酸度高時(shí)，反應(yīng)速度慢， 酸度太低，亞鐵離子易水解，影響測(cè)定。 三、儀器與試劑 儀器： 722（或其他型號(hào)）型分光光度計(jì)、容 量瓶、吸量管。 100mg/ml鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液、 10 mg/ml鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液、 10%鹽酸羥胺（臨時(shí)配置）、 0.1%鄰二氮雜 菲溶液（新配置）、 1mol/L醋酸鈉溶液、鐵 未知液。 四、實(shí)驗(yàn)操作步驟 1 10 ug/mL鐵標(biāo)準(zhǔn)使用液和水樣的配制 用移液管移取 100 ug/mL的鐵標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 10.00 mL，置于 100mL容量瓶中，加入 2 mL 6 molL HCl，用蒸餾水稀釋至 刻度，搖勻。 2標(biāo)準(zhǔn)系列的配制 用
3、刻度移液管分別移取上一步驟配制的鐵標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（ 10ug/mL）： 0.0、 1.0、 2.0、 4.0、 6.0、 8.0、 10.0 mL依次放入 7只 50mL容量瓶中， 分別加入 10%鹽酸羥胺 溶液 1.0 mL，稍搖動(dòng)，再加入 0.1%鄰二氮菲 溶液 2.0 mL及 Hac-NaAc緩沖溶液 5 mL，稀釋至刻度，充分搖勻。 四、實(shí)驗(yàn)操作步驟 3.測(cè)量條件實(shí)驗(yàn) 吸收曲線的測(cè)繪： 取上述標(biāo)準(zhǔn)系列中鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液用量為 6.0 mL的顯色溶液，在分光光度計(jì)上， 從波長(zhǎng) 440nm開始，以含鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 為 0.0 mL的試液為參比，每隔 20nm測(cè) 定一次吸光度 A值。當(dāng)臨近最大吸收波 長(zhǎng)
4、附近時(shí)應(yīng)每間隔 5 10nm測(cè)定一次 A 值。 以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)制 出吸收曲線，從吸收曲線上確定最大 吸收波長(zhǎng)（ max ). A 4.鐵含量的測(cè)定 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 1 2 3 4 5 6 10 mg/ml 鐵標(biāo)準(zhǔn)溶 液 參比 2 ml 3 ml 4 ml 5 ml 6 ml 以不加鐵標(biāo)準(zhǔn) 溶液的試液為 參比液，上一 步驟所選擇的 最大吸收波長(zhǎng) 為測(cè)定波長(zhǎng)， 依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn) 系列中各溶液 的吸光度 A值。 以鐵的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)， A值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 5水樣微量鐵的測(cè)定 準(zhǔn)確移取 5 10mL（以所測(cè)吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)為宜） 未知試樣溶液，按同樣步驟和方法測(cè)定吸光度
5、 A值。在標(biāo) 準(zhǔn)曲線上查出所含鐵的濃度，計(jì)算水樣中鐵的含量。 五、結(jié)果與數(shù)據(jù)處理 1.吸收曲線的繪制： 將各波長(zhǎng)及相應(yīng)的吸光度 列出，用坐標(biāo)紙繪制吸收 曲線。吸光度最大時(shí)相應(yīng) 的波長(zhǎng)即為最大吸收波長(zhǎng)， 并在圖上標(biāo)出。 A max 以鐵含量為坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo) 在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 由未知液的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查 出 5ml未知液中的鐵含量； 計(jì)算每毫升未知液中含多少克鐵。 SP-72型可見分光光度計(jì) SP-72型分光光度計(jì) 1儀器性能的檢查 （ 1）接通電源，讓儀器預(yù)熱至少二十分鐘，使儀器進(jìn)入熱穩(wěn)定工 作狀態(tài)。 （ 2）儀器接通電源后，即進(jìn)入自檢狀態(tài)。顯示器實(shí)時(shí)顯示儀器的 自檢狀態(tài)。當(dāng)儀
6、器發(fā)生故障時(shí)，顯示器會(huì)自動(dòng)顯示故障位置。自檢結(jié) 束，儀器自動(dòng)尋找光源最大能量，查找完畢，儀器自動(dòng)停留在 546nm 處，并自動(dòng)調(diào) 100%T和 0%T。顯示器上顯示 546nm和“ 100.0%T”。 儀器此時(shí)進(jìn)入測(cè)試狀態(tài)。 2使用方法 （ 1）按“方式鍵”（ Mode）將測(cè)試方式設(shè)置為吸光度方 式。 （ 2）按“波長(zhǎng)設(shè)置”鍵設(shè)置想要的分析波長(zhǎng)，如 340nm。 （ 3）將參比溶液和被測(cè)溶液分別倒入比色皿中。注意比色 皿內(nèi)的溶液面高度不應(yīng)低于 25毫米，大約 2.5毫升；被測(cè)試的 樣品中不能有氣泡和漂浮物。 （ 4）打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿 槽中，蓋上樣品室蓋。注意：一般情況下，參比樣品放在樣品 架的第一個(gè)槽位中；儀器所附的比色皿，其透視率是經(jīng)過(guò)測(cè)試 匹配的，未經(jīng)匹配處理的比色皿將影響樣品的測(cè)試精度；比色 皿的透光部分表面不能有指印和溶液痕跡。 （ 5）將參比溶液推入光路中，按“ 100%T”鍵調(diào)整零吸光 度。 （ 6）將被測(cè)溶液推或拉入光路中，此時(shí)，顯示器上所顯示 的是被測(cè)樣品的吸光度數(shù)值。
鄰二氮菲分光光度法測(cè)鐵722型分光光度計(jì)
