玉米莖尖分生組織叢生芽高頻誘導(dǎo)和再生體系建立

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1、 玉米莖尖分生組織叢生芽高頻誘導(dǎo)和再生體系建立 玉米是世界三大糧食作物之一 , 轉(zhuǎn)基因是提高玉米產(chǎn)量和品質(zhì)的有效方法。 成功的轉(zhuǎn)基因體系依賴于良好的受體系統(tǒng)。 目前 , 幼胚仍然是玉米轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)中最重要的外植體。而由成熟胚莖尖分 生組織誘導(dǎo)而來的叢生芽與傳統(tǒng)的幼胚相比 , 具有不受季節(jié)限制 , 誘導(dǎo)率高 , 再生 植株無變異等優(yōu)勢(shì)。 如何高頻的誘導(dǎo)叢生芽并再生成為完整植株正是本課題的研究目的所在。 本 研究主要獲得的結(jié)果有以下幾點(diǎn)： 1、以 CML295莖尖分生組織為受體材料 , 根據(jù)

2、 實(shí)驗(yàn)所得濃度范圍分別配制 8 種含有不同濃度 6-BA 和 2,4-D 的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行 誘導(dǎo) , 每種培養(yǎng)基包含 3 次重復(fù)試驗(yàn) , 并最終以誘導(dǎo)頻率的高低作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn) 行極差分析 , 誘導(dǎo)頻率最高達(dá)到 63%。 2、以 3.5 ：0.5 和 3.0 ：0.5 兩種誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的叢生芽為對(duì)象 , 研究 叢生芽的繼代和擴(kuò)繁能力。 3.5 ：0.5 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的叢生芽能繼代培養(yǎng) 6 個(gè)月 左右 , 后期擴(kuò)繁能力較差： 3.0 ： 0.5 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的叢生芽可以繼代 12 個(gè)月左 右 , 后期仍具有一定的擴(kuò)繁能力： 而在

3、 3.5 ：0.5 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)并在 3.0 ：0.5 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)的叢生芽在繼代 16 個(gè)月后仍有較好的生長狀態(tài)和較高的 增殖能力。 3、通過對(duì)各誘導(dǎo)培養(yǎng)基上所誘導(dǎo)出叢生芽的質(zhì)量進(jìn)行對(duì)比分析 , 建立叢生芽 質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。將誘導(dǎo)頻率 , 增殖速度和誘導(dǎo)質(zhì)量等因素相結(jié)合 , 得到 6-BA 濃度 為 3.2mg/L,2,4-D 濃度為 0.5mg/L 的誘導(dǎo)培養(yǎng)基最為適宜 4、用不同生長時(shí)期的叢生芽制作樣品進(jìn)行掃描電鏡觀察。 觀察到誘導(dǎo)前、 中、后期三個(gè)階段芽組織及周圍幼葉的不同形態(tài)特征。 誘導(dǎo) 前期莖尖生長不明顯；中期形成瘤狀突起 , 幼葉上有少量纖毛狀突起；后期叢生 芽形成 , 幼葉上布滿纖毛狀突起。 5、叢生芽誘導(dǎo)完成后 , 分別取繼代培養(yǎng) 2 個(gè)月、 4 個(gè)月和 6 個(gè)月的叢生芽塊 進(jìn)行分化再生 , 得到的結(jié)果是繼代培養(yǎng) 2 個(gè)月的叢生芽分化培養(yǎng) 20 天的分化率達(dá) 到 80%,生根率 60%,繼代培養(yǎng) 4 個(gè)月的叢生芽分化率為 50%,而培養(yǎng) 6 個(gè)月的叢生芽短時(shí)間未能分化成苗。 到 到 到