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同位素標(biāo)記法在高中生物的應(yīng)用: 同位素標(biāo)記法是利用放射性同位素作為示蹤劑對研究對象進(jìn)行標(biāo)記的微量分析方法,生物學(xué)上經(jīng)常使用的同位素是組成原生質(zhì)的主要元素,即H、N、C、S、P和O等的同位素。
在浙科版必修1P6教材中也有說明:放射性同位素可用于追蹤物質(zhì)的運(yùn)行和變化規(guī)律。此研究方法在高中生物教材中多次出現(xiàn),總結(jié)如下:
1.分泌蛋白的合成與分泌(必修1P40簡答題)
20世紀(jì)70年代,科學(xué)家詹姆森等在豚鼠的胰腺細(xì)胞中注射3H標(biāo)記的亮氨酸。3min后被標(biāo)記的亮氨酸出現(xiàn)在附有核糖體的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中;1
2、7min后,出現(xiàn)在高爾基體中;117min后,出現(xiàn)在靠近細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的囊泡中及釋放到細(xì)胞外的分泌物中。由此發(fā)現(xiàn)了分泌蛋白的合成與分泌途徑:核糖體→內(nèi)質(zhì)網(wǎng)→高爾基體→囊泡→細(xì)胞膜→外排。
2.光合作用中氧氣的來源
1939年,魯賓和卡門用18O分別標(biāo)記H2O和CO2,然后進(jìn)行兩組對比實(shí)驗(yàn):一組提供H2O和C18O2,另一組提供H218O和CO2。在其他條件相同情況下,分析出第一組釋放的氧氣全部為O2,第二組全部為18O2,有力地證明了植物釋放的O2來自于H2O而不是CO2。
3.光合作用中有機(jī)物的生成
20世紀(jì)40年代美國生物學(xué)家卡爾文等把單細(xì)胞的小球藻短暫暴露在含14C的CO2里,然后把
3、細(xì)胞磨碎,分析14C出現(xiàn)在哪些化合物中。經(jīng)過10年努力終于探索出了光合作用的“三碳途徑”——卡爾文循環(huán)。為此,卡爾文榮獲“諾貝爾獎(jiǎng)”。
4.噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)
1952年,赫爾希和蔡斯以T2噬菌體為實(shí)驗(yàn)材料,用35S、32P分別標(biāo)記噬菌體的蛋白質(zhì)外殼和DNA,再讓被35S、32P分別標(biāo)記的兩種噬菌體去侵染大腸桿菌,經(jīng)離心處理后,分析放射性物質(zhì)的存在場所。此實(shí)驗(yàn)有力證明了DNA是遺傳物質(zhì)。
5.DNA的半保留復(fù)制
1957年,美國科學(xué)家梅塞爾森和斯坦?fàn)栍煤?5N的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌,使之變成“重”細(xì)菌,再把它放在含14N的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。在不同時(shí)間取樣,并提取DNA進(jìn)行密度梯度離心,
4、根據(jù)輕重鏈浮力等的不同,就分出新生鏈和母鏈,這就證實(shí)了DNA復(fù)制的半保留性。
6.基因工程
在目的基因的檢測與鑒定中,采用了DNA分子雜交技術(shù)。將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA提取出來,在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素作標(biāo)記,以此為探針使之與基因組DNA雜交,如果顯示出雜交帶,就表明目的基因已導(dǎo)入受體細(xì)胞中。
另外,還可采用同樣方法檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,不同的是從轉(zhuǎn)基因生物中提取的是mRNA。
7.基因診斷
基因診斷是用放射性同位素(如32P)、熒光分子等標(biāo)記的DNA分子作探針,依據(jù)DNA分子雜交原理,鑒定被檢測樣本上的遺傳信息,從而達(dá)到檢測疾病的目的。
另外,還可
5、以用在植物有機(jī)物的運(yùn)輸研究過程中。
示蹤原子不僅用于科學(xué)研究,還用于疾病的診斷和治療。例如,射線能破壞甲狀腺細(xì)胞,使甲狀腺腫大得到緩解。因此,碘的放射性同位素就可用于治療甲狀腺腫大。
利用到同位素示蹤的實(shí)驗(yàn)有:
1.光合作用中釋放出的氧來自水還是二氧化碳:美國科學(xué)家魯賓和卡門采用同位素標(biāo)記法研究了這個(gè)問題,證明得到氧全部來自水而不是二氧化碳。
2.噬菌體侵染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn):1952年赫爾希和蔡斯用大腸桿菌T2噬菌體作為試驗(yàn)材料,分別含有放射性同位素S35和放射性同位素P32的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌。然后用T2噬菌體分別浸染上述細(xì)菌,從而制備出DNA中含有P32或蛋白質(zhì)中還有S35的噬菌體。接著
6、,他們分別用被P32或S35標(biāo)記的T2噬菌體去感染未被標(biāo)記的細(xì)菌,經(jīng)過短時(shí)間的保溫,用攪拌器攪拌,離心,這時(shí),離心管的上清液中就會析出重量較輕的T2噬菌體顆粒,而離心管的沉淀物中則含有被感染的細(xì)菌。從而證明DNA才是真正的遺傳物質(zhì)!
3.光合作用中固定CO2的途徑標(biāo)記的C的放射性同位素,從而證實(shí)C4植物光合作用中的C4途徑發(fā)生在葉肉細(xì)胞的葉綠體內(nèi),C3途徑發(fā)生在維管束鞘細(xì)胞的葉綠體內(nèi),兩者共同完成二氧化碳的固定。
4.各種生物膜在功能上的聯(lián)系:科學(xué)家在豚鼠的胰臟腺細(xì)胞中注射H3標(biāo)記的亮氨酸結(jié)果別標(biāo)記的氨基酸分別出現(xiàn)在附著于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體,高爾基體,細(xì)胞膜。從而證明各種生物膜在功能上是有聯(lián)系的
5.還有一個(gè)就是用含有15N標(biāo)記的NH4CL培養(yǎng)液培養(yǎng)大腸桿菌,讓它繁殖幾代,再將它轉(zhuǎn)移到14N普通培養(yǎng)液中。然后在不同時(shí)刻收集它并提取DNA,再將DNA進(jìn)行密度梯度離心,記錄DNA位置。這個(gè)是來證明DNA復(fù)制是半保留復(fù)制。