LST 6119-2017 糧油檢驗(yàn) 植物油中多酚的測(cè)定 分光光度法 doc版 僅供參考

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ICS 67.040X 04 LS中 華 人 民 共 和 國(guó) 糧 食 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)LS/T 6119—2017糧油檢驗(yàn) 植物油中多酚的測(cè)定分光光度法Inspection of grain and oils—Determination of polyphenols in vegetable oil—Spectrometric method2017 - 09 - 15 發(fā)布 2017 - 09 - 15 實(shí)施國(guó)  家  糧  食  局   發(fā) 布LS/T 6119—20171前  言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009 給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家糧食局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)糧油標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC 270）歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國(guó)家糧食局科學(xué)研究院、國(guó)家林業(yè)局國(guó)有林場(chǎng)和林木種苗工作總站、中紡糧油進(jìn)出口有限責(zé)任公司、中糧食品營(yíng)銷有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張東、楊超、薛雅琳、趙兵、歐國(guó)平、朱琳、劉寶珍、安駿。LS/T 6119—20172糧油檢驗(yàn) 植物油中多酚的測(cè)定 分光光度法1　范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了采用分光光度法測(cè)定植物油中多酚含量的原理、試劑、儀器、試樣制備、操作步驟、結(jié)果表示及精密度等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物油中多酚含量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的檢出限為6mg/kg。2　規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6379.1 測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度） 第1部分：總則與定義GB/T 6379.2 測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度) 第2部分：確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法GB/T 15687 動(dòng)植物油脂 試樣的制備3　原理植物油中多酚經(jīng)二醇基小柱凈化后，福林酚試劑氧化多酚中-OH基團(tuán)并顯藍(lán)色，在最大吸收波長(zhǎng)750nm處測(cè)定溶液的吸光度，以沒食子酸作校正標(biāo)準(zhǔn)定量測(cè)定植物油中多酚含量。4　試劑除非另有說明，在分析中應(yīng)使用分析純?cè)噭疄镚B/T 6682推薦使用的三級(jí)水。4.1　甲醇：色譜純。4.2　正己烷：色譜純。4.3　甲醇-水溶液：準(zhǔn)確移取 50mL 甲醇（4.1）至 100mL 容量瓶，用水定容至刻度。4.4　碳酸鈉。4.5　福林酚（Folin-Ciocalteu）試劑。4.6　7.5%碳酸鈉溶液（質(zhì)量濃度）：稱取 7.5g±0.01g 碳酸鈉（4.4），加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL 容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。4.7　沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%，相對(duì)分子質(zhì)量 170.12。LS/T 6119—201734.8　沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg/mL）：稱取 0.100g±0.001g 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（4.7），加入少量甲醇（4.1）溶解后，轉(zhuǎn)移至 100mL 容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。4.9　沒食子酸工作液：用移液管分別移取 1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL 沒食子酸準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.8）于 100mL 容量瓶中，分別用水定容至刻度，搖勻，濃度分別為10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL。5　儀器5.1　分析天平：感量 1mg。5.2　水浴鍋：70℃±1℃。5.3　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：帶控溫裝置。5.4　分光光度計(jì)：波長(zhǎng) 750nm；石英比色皿，10mm。5.5　二醇基（Diol）固相萃取柱：規(guī)格為 500mg，3mL。5.6　冷凍離心機(jī)：可控溫，轉(zhuǎn)速 10000rpm。5.7　渦旋振蕩儀。5.8　氮吹儀。6　試樣制備按GB/T 15687執(zhí)行。7　操作步驟7.1　柱活化二醇基固相萃取柱（5.5）依次用10mL甲醇（4.1）和10mL正己烷（4.2）活化，流速為2.0mL/min。7.2　凈化準(zhǔn)確稱取2g（精確至0.001g）試樣（6）溶于6mL正己烷（4.2）中，將該溶液以1.0mL/min流速過二醇基固相萃取柱（5.5），然后再用10mL正己烷（4.2）淋洗萃取柱，棄去全部的流出液，最后用10mL甲醇（4.1）洗脫，收集全部的洗脫液，于45℃水?。?.2）中弱氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)苡?mL甲醇-水溶液（4.3）中，渦旋振蕩1min，-18℃冷凍16h，4℃下10000rpm離心5min，取上清液，待測(cè)。7.3　測(cè)定用移液管分別移取沒食子酸工作液（4.9）、水（空白）及樣品待測(cè)液各1mL于刻度試管中，加入0.5mL福林酚試劑（4.5）、2mL 7.5%碳酸鈉溶液（4.6）和 6.5mL水，渦旋振蕩1min，70℃水浴中反應(yīng)30min，用10mm比色皿，在750nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定吸光度（ A）。若吸光度不在0.1~0.8之間時(shí)，應(yīng)適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣品的稱樣量或稀釋待測(cè)溶液，再重新進(jìn)行測(cè)定。LS/T 6119—20174根據(jù)沒食子酸工作液的吸光度（ A）與各工作溶液的沒食子酸濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。8　結(jié)果表示..................................(1)102??mDCX式中：X——植物油中多酚的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；C——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得多酚濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；D——樣品定容后的稀釋倍數(shù)，如未進(jìn)行稀釋，則 D=1；2——洗脫液蒸干后定容體積，單位為毫升（mL）；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。9　精密度9.1　重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩個(gè)獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值小于等于重復(fù)性限（ r）的情況應(yīng)大于95%。多酚含量的重復(fù)性限（ r）參見附錄A。9.2　再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩個(gè)獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值小于等于再現(xiàn)性限（ R）的情況應(yīng)大于95%。多酚含量的再現(xiàn)性限（ R）參見附錄A。LS/T 6119—20175A A附　錄　A（資料性附錄）實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)表A.1和表A.2給出了5種類型油脂以及多家實(shí)驗(yàn)室采用分光光度法測(cè)定植物油中多酚含量的結(jié)果，測(cè)試結(jié)果按GB/T 6379.1和GB/T 6379.2進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表A.2。表 A.1　樣品樣品A 10%橄欖油+90%精煉油茶籽油樣品B 油茶籽毛油樣品C 50%橄欖油+50%精煉油茶籽油樣品D 70%橄欖油+30%精煉油茶籽油樣品E 橄欖油表 A.2　實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果樣品 樣品 A 樣品 B 樣品 C 樣品 D 樣品 E實(shí)驗(yàn)室數(shù)目 10 10 10 10 10參加統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)室數(shù)目 10 10 10 10 10離群實(shí)驗(yàn)室數(shù)目 3 2 0 1 1平均值/（mg/kg） 10.70 17.84 61.87 91.79 135.76重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差， Sr 0.60 0.54 2.30 3.65 3.30重復(fù)性限， r 1.69 1.50 6.45 10.23 9.23重復(fù)性變異系數(shù)/% 5.64 3.01 3.72 3.98 2.43再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差， SR 2.33 2.50 13.02 13.65 21.43再現(xiàn)性限， R 6.53 6.99 36.44 12.26 18.52再現(xiàn)性變異系數(shù)/% 21.81 13.99 21.04 14.88 15.79_________________________________