《實驗診斷》PPT課件.ppt

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1、臨床病原體檢測芮勇宇南 方 醫(yī) 科 大 學 南 方 醫(yī) 院 檢 驗 醫(yī) 學 科 某 年 9月 某 日 晚 上 某 院 急 診 科 來 一 病 人 ， 突然 起 病 ， 寒 戰(zhàn) 、 劇 烈 頭 痛 、 惡 心 嘔 吐 ， 面 色潮 紅 、 眼 結(jié) 膜 充 血 、 咳 嗽 ， 左 耳 紅 腫 熱 痛 ，體 溫 40 。案 例 分 析 醫(yī) 生 及 時 抽 血 進 行 血 液 培 養(yǎng) ， 血 常 規(guī) 白 細胞 增 高 及 核 左 移 。 初 步 診 斷 敗 血 癥 ， 收 入 院 ， 使 用 泰 能 。 但 是 使 用 泰 能 3天 ， 病 人 癥 狀 沒 有 改 善 ， 血液 培 養(yǎng) 陰 性 ， 給

2、 家 屬 下 病 危 通 知 書 。案 例 分 析 請 南 方 醫(yī) 院 專 家 會 診 ， 詳 細 詢 問 病 史 和 仔 細體 查 ， 得 到 重 要 線 索 ， 病 人 一 周 前 爬 過 白 云山 ， 并 躺 在 草 地 上 休 息 ； 病 人 左 耳 有 似 被 蚊蟲 叮 咬 后 形 成 焦 痂 。案 例 分 析 懷 疑 恙 蟲 病 ， 外 裴 試 驗 陽 性 。 恙 蟲 病 立 克 次對 頭 孢 菌 素 類 耐 藥 ， 用 四 環(huán) 素 類 抗 生 素 ， 1天后 退 熱 ， 繼 續(xù) 用 藥 1周 ， 病 人 康 復 出 院 。 病 原 體 檢 測 重 要 性 ： 明 確 臨 床 診

3、斷 和 指 導 臨床 用 藥 。案 例 分 析 免 疫 室 ： 酶 鏈 免 疫 吸 附 試 驗 （ ELISA） 、 膠體 金 層 析 試 紙 條 、 化 學 發(fā) 光 或 電 化 學 發(fā) 光 、乳 膠 凝 集 方 法 。 檢 測 肝 炎 病 毒 、 性 病 、 呼 吸 系 統(tǒng) 病 原 體 抗 原或 抗 體 。檢 驗 科 三 個 實 驗 室 合 作 進 行 病 原 體 檢 查 基 因 室 ： 熒 光 定 量 PCR方 法 ， 定 量 檢 測 病 原體 基 因 。 細 菌 室 （ 重 點 ） ： 涂 片 檢 查 、 培 養(yǎng) 鑒 定 和 藥敏 試 驗 ， 檢 測 細 菌 真 菌 。檢 驗 科 三 個

4、 實 驗 室 合 作 進 行 病 原 體 檢 查 第 一 部 分 細 菌 真 菌 涂 片 檢 查 及 臨 床 意 義第 二 部 分 細 菌 真 菌 培 養(yǎng) 鑒 定 及 臨 床 意 義第 三 部 分 細 菌 真 菌 藥 敏 檢 測 及 臨 床 意 義第 四 部 分 臨 床 各 科 科 研 工 作 結(jié) 合 本 次 課 Part 1 Morphological examinations of bacteria and fungi1 non-stained. 2 gram stain, bacteria and fungi.3 acid-fast stain, acid-fast bacillus.4

5、 Indian ink stain, cryptococcus. single-celled, budding forms called yeast (spore). multicellular, filamentous forms called mold (spore and hypha). dimorphic fungi, exist in two distinct morphologic forms. 1 Non-stained Skin scraping, nail scraping ,and observation of hairs directly by microscopy ar

6、e also most helpful in diagnosing dermatophytic infections. Employing a drop of potassium hydroxide (15%) on a glass slide over the surface of the specimen. hairs Skin scraping Routine urine examination Basic principle？ Procedure？ Peptidoglycan. crystal violet, iodine, alcohol. carbofuchsin red. Res

7、ults, G+ or G-, cocci or bacilli bacteria, fungi, in oil immersion field.2 Gram-stained fungi in urine positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood sputum sputum sputum sputum sputum Fungi in leukorrhe

8、a, vaginitis Diplococcus Neisseria gonorrhoeae Basic principle? Procedure? Lipid. carbolfuchsin red, hydrochloric acid 3% alcohol, methylene blue. Results, acid-fast bacteria red, other bacteria and background blue.3 acid-fast stain The result report mode Negative, acid-fast bacilli not found, Posit

9、ive (1 or 2), 1 or 2 whole visual field, Positive （ +） , 3 to 9 whole visual field, Positive （ +） , 10 to 99 whole visual field, Positive （ +） , 1 to 9 every visual field, Positive （ +） , 10 every visual field. acid-fast bacilli from sputum（ +） Cryptococcus in cerebrospinal fluid. Basic principle, c

10、apsule. Procedure, sediment. Results. 4 the Indian ink stain Cryptococcus neoformans germinative Advantages. cheap, rapid, diagnose primarily. Disadvantages. Not accurate.Part 1 Morphological examinations of bacteria and fungi 第 二 部 分 細 菌 真 菌 培 養(yǎng) 鑒 定 及 臨 床 意 義一 、 血 液二 、 中 段 尿三 、 糞 便四 、 痰 液五 、 咽 拭 子六

11、 、 穿 刺 液七 、 分 泌 物八 、 器 械 一 、 血 液 的 病 原 體 檢 查 Etiologic Examination of Blood and Bone Marrow 目 的 和 意 義 ； 采 血 指 征 ； 采 血 注 意 事 項 ; 結(jié) 果 報 告 形 式 。 目 前 我 國 社 會 老 齡 化 日 趨 嚴 重 ， 慢 性 病 及 惡 性 腫瘤 、 器 官 移 植 、 愛 滋 病 和 結(jié) 核 病 病 人 不 斷 增 多 ， 侵 襲性 診 療 技 術(shù) 廣 泛 應 用 ， 敗 血 癥 發(fā) 病 率 不 斷 增 加 。 敗 血 癥 病 死 率 30%以 上 ； 早 期 病 原 學

12、 診 斷 和 合 理 抗生 素 治 療 ， 明 顯 降 低 敗 血 癥 病 死 率 。 血 液 培 養(yǎng) 的 送 檢 指 征 ： 發(fā) 熱 38 或 低 溫 10 109/L， “ 核 左 移 ” 白 細 胞 增 多 ； 粒 細 胞 減 少 ， 成 熟 的 多 核 白 細 胞 90次 /分 ； 呼 吸 頻 率 20次 /分 ； 二 氧 化 碳 分 壓 32mmHg； 昏 迷 ； 多 器 官 衰 竭 。 最 好 在 抗 生 素 使 用 前 采 集 ， 若 已 用 抗 菌 藥 須 ， 則 盡 量 避 開 血 藥 濃 度 的 高峰 期 ， 最 好 在 下 次 用 藥 前 。血 液 標 本 采 集 時 間

13、 血 液 標 本 采 集 時 間 理 想 狀 態(tài) ： 在 發(fā) 熱 高 峰 期 前 半 小 時 ， 建 議 第 一 次 可 在 病 人 發(fā) 熱 初 期 或 高 峰 期 采 集 ， 根 據(jù) 病 人 發(fā) 熱 情 況 ， 在 24h內(nèi) 再 取 2-3次 標 本 ， 最 好 每 次 “ 雙 套 ” “ 雙 瓶 ” ， “ 雙 套 ” 指 不 同采 血 部 位 ， “ 雙 瓶 ” 指 樹 脂 瓶 和 厭 氧 瓶 。血 液 標 本 采 集 時 間 標 準 血 培 養(yǎng) 瓶 （ 藍 色 帽 ） ： 帽 子 和 標 簽 紙 左 上 方 為 藍 色 ， “ Standard 10 Aerobic/F”， 用 于 成

14、 人 需 氧 菌 和 真 菌 培 養(yǎng) ， 血 液 量 3-10ml ， 8-10ml最 佳 。 中 和 抗 生 素 的 樹 脂 瓶 （ 灰 色 帽 ） ：帽 子 和 標 簽 紙 左 上 方 為 灰 色 ，“ PLUS+Aerobic/F” ，血 液 量 3-10ml ， 8-10ml最 佳 。 厭 氧 瓶 （ 黃 色 或 橘 紅 色 帽 ） ：帽 子 和 標 簽 紙 左 上 方 為 黃 色 ，“ Standard Anaerobic/F”，血 液 量 3-7ml ， 5-7ml最 佳 。 中 和 抗 生 素 的 兒 童 瓶 （ 粉 紅 色帽 ） ：帽 子 和 標 簽 紙 左 上 方 為 粉 紅

15、 色 ，“ PEDS PLUS/F”, 血 液 量 1-3ml。 采 集 標 本 前 先 開 申 請 單 ，到 檢 驗 科 細 菌 室 或 門 診 領(lǐng)取 血 培 養(yǎng) 瓶 ； 采 血 前 先 在 培 養(yǎng) 瓶 標 簽 紙左 側(cè) 空 白 處 （ 箭 頭 所 指 處 ）填 寫 抽 血 時 間 和 病 人 科 別 、床 號 和 姓 名 ； 不 要 在 培 養(yǎng) 瓶 條 形 碼 上 涂寫 ， 以 免 影 響 掃 描 。 將 標 簽 紙 上 條 形碼 右 側(cè) 部 分 （ 含數(shù) 字 ） 撕 下 貼 于檢 查 申 請 單 上 ； 而 其 它 標 本 均 是將 申 請 單 上 雙 聯(lián)號 碼 撕 下 貼 于 標本 上

16、 。 注 射 器 采 血 后 ， 將 血培 養(yǎng) 瓶 帽 子 揭 下 ， 橡皮 由 金 屬 皮 （ 圍 脖 ）固 定 于 瓶 上 ；將 橡 皮 塞 用 70%酒 精 消毒 ， 注 射 器 針 頭 刺 穿橡 皮 塞 將 血 注 入 培 養(yǎng)瓶 內(nèi) ；橡 皮 塞 裸 露 即 可 。 細 菌 室 接 到 已 采 集 血 液 的 培 養(yǎng) 瓶 后 ， 立 即 放 入自 動 血 液 培 養(yǎng) 檢 測 儀 ， 自 動 培 養(yǎng) 及 實 時 檢 測 。 陽 性 初 步 結(jié) 果 報 告 ： 儀 器 陽 性 報 警 ， 90%以 上 陽 性 標 本 24h內(nèi) 檢 出 ； 取 出 陽 性 瓶 ， 對 血 液 涂 片 及 革

17、 蘭 氏 染 色 ； 立 即 將 涂 片 結(jié) 果 （ G+、 G-細 菌 ， 球 菌 或 桿 菌 ，或 真 菌 ） 電 話 通 知 相 應 科 室 ， 并 在 網(wǎng) 上 發(fā) 出 ； 利 用 陽 性 血 液 進 行 K-B法 藥 敏 試 驗 ， 第 二 天 將初 步 藥 敏 結(jié) 果 電 話 通 知 相 應 科 室 。結(jié) 果 報 告 形 式 陽 性 最 終 結(jié) 果 報 告 ： 將 陽 性 血 液 接 種 血 平 板 培 養(yǎng) 細 菌 ； 第 二 天 將 血 平 板 上 生 長 的 細 菌 鑒 定 及 MIC法 藥敏 試 驗 ； 第 三 天 發(fā) 鑒 定 及 MIC法 藥 敏 結(jié) 果 的 正式 報 告 。

18、陰 性 結(jié) 果 報 告 ： 如 培 養(yǎng) 5天 仍 為 陰 性 ， 再 接 種 血 平 板 培 養(yǎng) 一 天 ，核 實 為 陰 性 后 再 發(fā) 報 告 。結(jié) 果 報 告 形 式 二 、 中 段 尿 標 本 病 原 體 檢 查 Etiologic Examination of Urine 目 的 和 意 義 ； 采 集 方 法 ; 結(jié) 果 報 告 形 式 。 檢 測 泌 尿 系 統(tǒng) 感 染 ； 一 般 進 行 細 菌 和 真 菌 培 養(yǎng) 、 菌 落 計 數(shù) 和 藥 敏 ； 也 可 離 心 后 對 沉 渣 進 行 涂 片 檢 查 ， 革 蘭 氏 染色 或 抗 酸 染 色 ； 也 可 用 于 淋 球 菌

19、 培 養(yǎng) 和 涂 片 檢 查 。目 的 和 意 義 最 常 采 集 中 段 尿 ， 晨 起 第 一 次 尿 送 檢 最 佳 ； 先 用 肥 皂 水 、 或 1： 1000高 錳 酸 鉀 水 溶 液 沖 洗女 性 外 陰 部 及 尿 道 口 或 男 性 尿 道 口 ， 再 用 滅菌 水 清 洗 ， 最 后 用 滅 菌 紗 布 檫 拭 ； 排 尿 棄 去前 段 尿 ， 留 取 中 段 尿 約 10ml于 無 菌 容 器 內(nèi) 加蓋 送 檢 。 采 集 方 法 尿 道 病 原 菌 可 在 溫 暖 尿 液 中 繁 殖 ， 中 段 尿 標本 采 集 后 應 盡 快 送 檢 ， 否 則 將 影 響 病 原

20、菌 計數(shù) 的 準 確 性 ； 排 尿 困 難 者 可 導 尿 ， 避 免 多 次 導 尿 所 致 尿 路感 染 ， 導 尿 包 必 須 為 無 菌 的 合 格 產(chǎn) 品 。采 集 方 法 “ 培 養(yǎng) 出 3種 以 上 細 菌 ， 疑 采 集 污 染 ， 重 留 標本 ” ： 如 培 養(yǎng) 出 3種 或 以 上 細 菌 ， 且 無 優(yōu) 勢 菌 ； 約10%的 標 本 不 合 格 ， 采 集 時 污 染 ， 采 集 中 段尿 （ 尤 其 女 性 ） 最 好 由 專 門 醫(yī) 護 人 員 指 導 采集 ， 以 減 少 污 染 。結(jié) 果 報 告 形 式 “ 培 養(yǎng) 出 少 量 某 種 細 菌 、 菌 落 計

21、 數(shù) 結(jié) 果 ” ： 如 菌 量 較 少 105 ml ， 且 必 須 有 優(yōu)勢 ， 才 可 以 確 定 為 感 染 ， 對 優(yōu) 勢 菌 進 行 鑒 定和 藥 敏 。 104 ml至 105 ml， 也 有 意 義 。 結(jié) 果 報 告 形 式 三 、 糞 便 標 本 病 原 體 檢 查 Etiologic Examination of Stool 目 的 和 意 義 ： 對 腸 道 疾 病 進 行 病 原 學 診 斷 ； 涂 片 染 色 ： 查 真 菌 、 弧 菌 、 球 菌 /桿 菌 比 ； 培 養(yǎng) 病 原 菌 和 藥 敏 ： 培 養(yǎng) 沙 門 氏 和 志 賀 菌 ； 培 養(yǎng) 弧 菌 ； 培

22、養(yǎng) 真 菌 ； 菌 群 失 調(diào) 病 人 ， 對 占 優(yōu) 勢 細 菌 進 行 鑒 定 藥 敏 。 標 本 采 集 ： 挑 取 含 膿 、 血 或 粘 液 糞 便 約 2-3g； 置 于 清 潔 容 器 或 置 于 保 存 液 中 送 檢 ； 排 便 困 難 者 或 嬰 幼 兒 可 用 直 腸 拭 子 采 集 。 檢 查 上 下 呼 吸 道 感 染 痰 液 （ 下 呼 吸 道 ） 和 咽 拭 子 （ 咽 喉 部 ） ； 可 進 行 涂 片 查 細 菌 、 真 菌 或 抗 酸 桿 菌 ； 可 進 行 細 菌 、 真 菌 或 結(jié) 核 桿 菌 培 養(yǎng) ； 上 述 檢 查 只 要 一 口 痰 即 可 ，

23、在 一 張 檢 查 申 請單 上 選 上 述 多 個 項 目 。四 和 五 、 呼 吸 道 標 本 的 病 原 體 檢 查 采 集 深 部 痰 （ sputum） ， 不 是 唾 液 和 口 水 ； 自 然 咳 痰 法 (Expectorated sputum)； 最 好 為 清 晨 第 一 口 痰 ， 用 清 水 反 復 漱 口 用 力咳 出 第 一 口 痰 于 無 菌 容 器 內(nèi) ； 支 氣 管 鏡 采 集 法 （ Bronchoscopy） 。采 集 方 法 報 “ 正 常 菌 群 ” ： 培 養(yǎng) 出 的 均 為 不 致 病 的 細 菌 ； 培 養(yǎng) 出 的 細 菌 種 類 較 多 且 無

24、 優(yōu) 勢 菌 ； 分 離 出 少 量 嗜 血 桿 菌 ,也 報 告 鑒 定 及 藥 敏 。結(jié) 果 報 告 形 式 報 “ 無 菌 生 長 ” ： 病 人 抗 生 素 使 用 過 度 導 致 ； 可 能 病 毒 、 支 原 體 、 衣 原 體 等 血 平 板 無 法 培養(yǎng) 。 結(jié) 果 報 告 形 式 報 “ 分 離 出 某 種 細 菌 或 真 菌 ， 比 例 ， 藥 敏 ” ： 分 離 出 致 病 菌 ， 而 不 是 常 見 的 正 常 菌 群 ， 且具 有 優(yōu) 勢 ， 約 占 血 平 板 菌 群 總 數(shù) 的 百 分 比 %； 同 一 病 人 如 痰 中 連 續(xù) 分 離 出 同 一 種 菌 ，

25、3天 內(nèi)如 果 已 經(jīng) 做 過 藥 敏 試 驗 ， 則 不 再 做 藥 敏 ； 同 一 病 人 痰 中 細 菌 的 種 類 和 比 例 ， 會 隨 著 治療 情 況 變 化 ， 也 受 留 取 痰 標 本 的 質(zhì) 量 影 響 。結(jié) 果 報 告 形 式 六 、 穿 刺 液 （ 腦 脊 液 ） 病 原 體 檢 查 Etiologic Examination of Cerebrospinal Fluid 目 的 和 意 義 ： 判 斷 是 否 為 感 染 性 疾 病 腦 脊 液 采 集 ： 通 過 腰 椎 穿 刺 術(shù) （ Lumber puncture） 以 無 菌 操 作 采 集 腦 脊 液 3-

26、5ml于 無菌 小 瓶 或 無 菌 試 管 中 ， 一 般 第 一 管 用 于 微 生物 學 檢 查 ； 六 、 穿 刺 液 （ 腦 脊 液 ） 病 原 體 檢 查 Etiologic Examination of Cerebrospinal Fluid 引 起 腦 膜 炎 的 病 原 體 腦 膜 炎 奈 瑟 菌 等 抵 抗 力弱 ， 不 耐 冷 ， 故 采 集 的 腦 脊 液 應 立 即 保 溫 送檢 或 床 邊 接 種 ; 可 查 一 般 細 菌 真 菌 、 隱 球 菌 、 抗 酸 桿 菌 。 其 它 穿 刺 液 ： 如 胸 腹 水 、 關(guān) 節(jié) 腔 液 等 ， 穿 刺 針 注 入無 菌 拭

27、 子 管 送 檢 或 將 注 射 器 直 接 送 檢 ； 如 為 多 管 穿 刺 液 或 相 關(guān) 組 織 ， 請 在 申 請 單 上 注 明 是否 都 做 培 養(yǎng) 鑒 定 ； 采 集 注 意 事 項 ： 注 意 無 菌 操 作 ； 如 培 養(yǎng) 出 類 白 喉 桿菌 ， 常 為 采 集 時 污 染 所 致 ； 可 用 血 液 培 養(yǎng) 瓶 培 養(yǎng) 。 七 、 分 泌 物 （ 傷 口 或 膿 液 ） 病 原 體 檢 查 開 放 性 化 膿 灶 ： 應 先 用 滅 菌 生 理 鹽 水 沖 洗 表面 污 染 菌 ， 再 用 棉 拭 子 蘸 取 或 注 射 器 吸 取 膿性 分 泌 物 ； 瘺 管 內(nèi) 膿

28、 液 ： 先 用 滅 菌 棉 拭 子 擠 壓 瘺 管 棄 去前 端 膿 液 ， 再 收 集 膿 汁 ； 七 、 分 泌 物 （ 傷 口 或 膿 液 ） 病 原 體 檢 查 封 閉 性 膿 腫 ： 可 用 注 射 器 穿 刺 抽 取 ； 疑 為 厭 氧 菌 感 染 者 ： 取 膿 液 后 立 即 排 凈 注 射器 內(nèi) 空 氣 ， 針 頭 插 入 無 菌 橡 皮 塞 送 檢 ； 如 為 液 體 ， 最 好 床 旁 接 種 厭 氧 血 培 養(yǎng) 瓶 ； 外 界 相 通 部 位 的 標 本 ， 如 痰 不 能 作 厭 氧 菌 培養(yǎng) 。 七 、 分 泌 物 （ 生 殖 道 ） 病 原 體 檢 查 Etio

29、logic Examination of STDs 性 傳 播 疾 病 ， 簡 稱 性 病 ， 是 一 組 通 過 性 行 為傳 播 的 ， 侵 犯 皮 膚 、 性 器 官 和 全 身 多 臟 器 損害 的 感 染 性 疾 病 ； 標 本 采 集 ： 常 取 生 殖 道 分 泌 物 ， 男 性 取 尿 道口 分 泌 物 或 前 列 腺 液 ， 女 性 取 外 陰 糜 爛 面 病灶 邊 緣 分 泌 物 、 陰 道 宮 頸 口 分 泌 物 等 。 淋 病 （ gonorrhea） 涂 片 染 色 鏡 檢 ： 急 性 淋 菌 性 尿 道 炎 敏 感 度 和 特 異 度 高 達 90%以 上 ； 對

30、慢 性 無 癥 狀 淋 病 的 女 性 患 者 涂 片檢 查 漏 診 率 達 40%， 故 必 須 同 時 進 行 培 養(yǎng) 。 培 養(yǎng) 鑒 定 及 藥 敏 結(jié) 果 準 確 ， 診 斷 金 標 準 。 解 脲 /人 型 支 原 體 ： 細 菌 室 開 展 了 培 養(yǎng) 鑒 定 及 藥 敏 方 法 ； 需 注 意 的 是 標 本 采 集 后 應 盡 快 送 檢 。 診 斷 試 劑 和 方 法 要 符 合 衛(wèi) 生 部 相 關(guān) 規(guī) 定 ； 注 意 保 護 病 人 的 隱 私 。 八 、 器 械 病 原 體 檢 查 Etiologic Examination of other specimens 靜 脈

31、插 管 等 標 本 ： 放 入 無 菌 拭 子 管 中 送 檢 ； 無 菌 試 驗 ： 懷 疑 醫(yī) 療 用 品 被 污 染 時 送 檢 ； 空 氣 培 養(yǎng) ： 到 細 菌 室 取 培 養(yǎng) 平 皿 置 于 待 測 地點 ， 打 開 平 皿 蓋 10min， 蓋 上 后 送 檢 ； 醫(yī) 護 人 員 手 培 養(yǎng) 和 物 表 培 養(yǎng) ： 到 細 菌 室 取 含消 毒 劑 中 和 液 的 無 菌 試 管 ， 用 棉 簽 涂 抹 后 放入 試 管 中 送 檢 。 第 三 部 分 細 菌 真 菌 藥 敏 檢 測 及 臨 床 意 義 藥 敏 結(jié) 果 檢 驗 報 告 的 解 讀 ， 細 菌 分 布 及 藥 敏

32、結(jié) 果 分 析 。 藥 敏 結(jié) 果 檢 驗 報 告 的 解 讀 MIC稀 釋 法 （ dilution method） K-B紙 片 擴 散 法 （ Kirby-Bauer method） E-test藥 敏 檢 測常 用 藥 敏 試 驗 方 法 K-B法 是 將 含 有 定 量 抗 菌 藥 物 的 紙 片 ， 貼 在 已 接種 測 試 菌 的 瓊 脂 平 板 上 ， 紙 片 中 所 含 藥 物 吸 收 瓊脂 中 水 分 溶 解 后 ， 不 斷 向 紙 片 周 圍 擴 散 形 成 遞 減的 梯 度 濃 度 。K-B紙 片 擴 散 法 藥 敏 試 驗 K-B法 藥 敏 試 驗 不 同 的 抗 生

33、 素 紙 片細 菌 接 種于 MH平 板 量 取 直 徑 MIC稀 釋 法 一 般 在 瓊 脂 或 肉 湯 中 將 抗 菌 藥 物 系 列 對 倍稀 釋 ， 定 量 接 種 待 檢 菌 ， 35 培 養(yǎng) 18至 24小 時 后 觀察 結(jié) 果 ； 抑 制 檢 測 菌 肉 眼 可 見 生 長 的 最 低 藥 物 濃 度 ， 即 最 小抑 菌 濃 度 ； MIC稀 釋 法 結(jié) 果 以 MIC（ g/ml） 數(shù) 值 報 告 ， 數(shù) 值 越小 越 敏 感 ， 與 K-B法 相 反 ；MIC稀 釋 法 藥 敏 檢 測 稀 釋 法 的 結(jié) 果 比 K-B法 的 更 準 確 。本 實 驗 室 利 用 細 菌

34、自 動 鑒 定 和 藥 敏 儀 ， 為 稀釋 法 藥 敏 試 驗 ， 由 儀 器 自 動 判 斷 藥 敏 結(jié) 果 。 藥 敏 檢 測 的 方 法 BD Phoenix 100 細 菌 自 動 鑒 定 及 藥 敏 分 析 儀 MIC稀 釋 法藥 敏 鑒 定 孔 生 化 試 驗細 菌 鑒 定 孔 E-test藥 敏 檢 測 結(jié) 合 K-B法 和 稀 釋 法 的 優(yōu) 點 ； 原 理 同 稀 釋 法 檢 測 ， 操 作 同 K-B法 簡 單 ； 試 紙 條 上 含 干 化 、 穩(wěn) 定 、 濃 度 由 高 到 低 呈 指數(shù) 梯 度 分 布 的 某 種 抗 菌 藥 物 ； 主 要 用 于 少 數(shù) 抗 生

35、素 結(jié) 果 的 驗 證 。 E-test藥 敏 檢 測 臨 床 實 驗 室 標 準 化 委 員 會 （ clinical laboratory standards of institute, CLSI） 標 準 判 斷 敏 感 （ susceptible， S） ： 推 薦 使 用 ； 中 介 （ intermediate， I） ： 藥 物 MIC接 近 體 液 或組 織 可 達 到 藥 物 濃 度 ， 但 反 應 低 于 敏 感 株 ； 耐 藥 （ resistant， R） ； 指 常 規(guī) 用 藥 劑 量 不 能 達 到MIC， 臨 床 療 效 不 可 靠 。藥 敏 檢 測 的 方 法

36、抗菌藥物的作用靶位 氨 基 糖 甙 類 ： 阿 米 卡 星 Amikacin、 慶 大 霉 素Gentamicin1代 頭 孢 ： 頭 孢 唑 啉 Cefazolin2代 頭 孢 ： 頭 孢 呋 辛 鈉 Cefuroxime sodium3代 頭 孢 ： 頭 孢 他 啶 Ceftazidime、 頭 孢 噻 肟Cefotaxime、 頭 孢 吡 肟 （ 馬 斯 平 ） Cefepime細 菌 室 藥 敏 試 驗 中 常 選 用 的 抗 生 素 種 類 單 環(huán) -內(nèi) 酰 胺 類 ： 氨 曲 南 Aztreonam廣 譜 青 霉 素 類 ： 氨 芐 西 林 Ampicilin、 青 霉 素 G P

37、enicillin、 苯 唑 西 林 Oxacillin 抗 假 單 胞 菌 廣 譜 青 霉 素 ： 哌 拉 西 林 Piperacillin 復 方 -內(nèi) 酰 胺 類 ：阿 莫 西 林 -克 拉 維 酸 （ 奧 格 門 丁 ）Amoxicilin/clavelanate氨 芐 西 林 -舒 巴 坦 （ 優(yōu) 力 新 ） Ampicillin/Sulbactam哌 拉 西 林 -他 唑 巴 坦 （ 特 治 星 ） Pioeracillin/Tazobactam頭 孢 哌 酮 -舒 巴 坦 （ 舒 普 深 ） efoperazone/Sulbactam碳 青 霉 烯 類 ： 亞 胺 培 南 Imi

38、penem、 美 羅 培 南 Meropenem 多 肽 類 ： 多 粘 菌 素 E Colistin E、 替 考 拉 寧Teicoplanin、 萬 古 霉 素 Vancomicin磺 胺 類 ： 復 方 新 諾 明 （ 甲 氧 芐 唑 -磺 胺 甲 唑 ）Timethoprim/Sulfamethoxazole林 可 霉 素 類 ： 克 林 霉 素 Clindamycin大 環(huán) 內(nèi) 脂 類 ： 紅 霉 素 Erythromycin 氯 霉 素 ： 氯 霉 素 Chloramphenicol三 代 喹 諾 酮 ： 環(huán) 丙 沙 星 Ciprofloxaxin 、 氧 氟 沙 星Ofloxax

39、in 、 左 旋 氧 氟 沙 星 Levofloxacin 、 莫 西沙 星 Moxifloxacin四 環(huán) 素 類 ： 四 環(huán) 素 Tetracycline利 福 平 Rifampin 產(chǎn) 超 廣 譜 -內(nèi) 酰 胺 酶 (extended spectrum -lactamase， ESBL)： 該 酶 水 解青 霉 素 、 頭 孢 菌 素 及 單 胺 類 的 超 廣 譜 -酶 ，主 要 由 肺 炎 克 雷 伯 菌 和 大 腸 埃 希 菌 等 腸 桿 菌科 細 菌 產(chǎn) 生 。 耐 甲 氧 西 林 葡 萄 球 菌 （ methecillin resistance staphylococcus，

40、MRS） ， CLSI規(guī) 定 ， 葡 萄 球 菌 如 對 苯 唑 西 林 （ 或 甲氧 西 林 ） 耐 藥 ： 對 青 霉 素 類 、 頭 孢 菌 素 類 、 碳青 霉 烯 類 和 含 酶 抑 制 劑 的 復 方 制 劑 均 應 報 告 耐藥 ， 而 不 考 慮 體 外 藥 敏 結(jié) 果 。 耐 高 濃 度 慶 大 霉 素 腸 球 菌 （ High level aminoglycosides resistance in Enterococcus） CLSI規(guī) 定 ， 腸 球 菌 引 起 的 全 身 性 嚴 重 感 染 ，常 聯(lián) 合 應 用 -內(nèi) 酰 胺 類 和 氨 基 糖 肽 類 抗 生 素 ，

41、如 果 腸 球 菌 對 高 濃 度 慶 大 霉 素 耐 藥 ， 則 聯(lián) 合 用藥 無 效 。 細 菌 分 布 及 藥 敏 結(jié) 果 分 析 不 同 類 型 標 本 分 離 細 菌 念 珠 菌 構(gòu) 成 比 % 痰 液 中 分 離 細 菌 念 珠 菌 主 要 種 類 及 構(gòu) 成 比 % 傷 口 分 泌 物 中 分 離 細 菌 念 珠 菌 主 要 種 類 及 構(gòu) 成 比 % 中 段 尿 中 分 離 細 菌 念 珠 菌 主 要 種 類 及 構(gòu) 成 比 % 血 液 中 分 離 細 菌 念 珠 菌 主 要 種 類 及 構(gòu) 成 比 % 大 腸 埃 希 菌 耐 藥 率 % 肺 炎 克 雷 伯 菌 耐 藥 率 %

42、 l 針 對 腸 桿 菌 科 細 菌 引 起 的 嚴 重 感 染 ，l 碳 青 霉 烯 類 抗 生 素 亞 胺 培 南 、 美 羅 培 南 耐藥 率 最 低 ，l 嗜 麥 芽 窄 食 單 胞 菌 對 碳 青 霉 烯 類 天 然 耐 藥 ，首 選 復 方 新 諾 明 。 鮑 曼 不 動 桿 菌 耐 藥 率 % 銅 綠 假 單 胞 菌 耐 藥 率 % l 針 對 鮑 曼 不 動 桿 菌 等 非 發(fā) 酵 G-桿 菌 引 起 的嚴 重 感 染 ，l 頭 孢 哌 酮 -舒 巴 坦 （ 舒 普 深 ） 和 碳 青 霉 烯 類抗 生 素 耐 藥 率 最 低 。 金 黃 色 葡 萄 球 菌 耐 藥 率 % 糞

43、 腸 球 菌 耐 藥 率 % l 針 對 葡 萄 球 菌 屬 、 腸 球 菌 屬 、 鏈 球 菌 屬 等G+球 菌 引 起 的 嚴 重 感 染 ，l 糖 肽 類 萬 古 霉 素 、 替 考 拉 寧 耐 藥 率 最 低 ，l 利 奈 唑 胺 耐 藥 率 也 是 最 低 ， 尤 其 用 于 治 療耐 萬 古 霉 素 腸 球 菌 感 染 。 第 四 部 分 結(jié) 合 本 次 課 可 開 展 的 科 研各 科 室 分 離 細 菌 真 菌 的 種 類 及 藥 敏 特 征 ；各 科 室 感 染 性 疾 病 診 斷 及 治 療 效 果 評 價 ；各 科 室 醫(yī) 院 感 染 因 素 分 析 和 防 治 措 施 研 究 。 Thank you!